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產(chǎn)品說明
匯智泰康公司的致瀉性大腸埃希氏菌多重PCR檢測試劑盒可同時檢測腸道致病性大腸埃希氏菌 (Enteropathogenic Escherichia coli.，EPEC)，腸道侵襲性大腸埃希氏菌(Enteroinvasive Escherichia coli.，EIEC)，產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌(Enterotoxigenic Escherichia coli.，ETEC)，腸道出血性大腸埃希氏菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli.，EHEC)，和腸道集聚性大腸埃希氏菌(Enteroaggregative Escherichia coli.，EAEC)5種常見的致瀉大腸埃希氏菌。
產(chǎn)品組成 （50次，25 µL PCR）
組分 | 數(shù)量 | 體積 |
Master Mix （2X） * | 1管 | 625 µL |
Primer Mix | 1管 | 125 µL |
陽性對照 | 1管 | 50 µL |
H2O | 1管 | 1.0 mL |
* Master Mix （2X）含有Taq DNA聚合酶， dNTP，含MgCl2的PCR優(yōu)化反應(yīng)緩沖液。使用頻率高時一旦融解請于4oC保存或分裝保存。
儲存條件
-20oC長期保存。多次反復(fù)凍融會降低檢測效率。
使用說明
- DNA樣本處理、反應(yīng)體系配制、核酸擴(kuò)增和結(jié)果鑒定等各步驟應(yīng)分域進(jìn)行，以避免交叉污染。
- 細(xì)菌基因組DNA可使用市售試劑盒提取，也可按以下方法快速制備：
從平板上挑取適量菌落，加入含有200 µL ddH2O的滅菌離心管中，渦旋震
- 菌液煮沸10 min，冷卻至室溫后，13,000 rpm離心2 min。
- 將上清移至新離心管中，即得可用于本試劑盒檢測的細(xì)菌DNA模板。
- PCR反應(yīng)液配制：
2 X Master Mix 12.5 µL
Primer Mix 2.5µL
陽性對照/樣品DNA 2 µL
H2O 8 µL
反應(yīng)終體積 25µL
- PCR反應(yīng)條件：
94oC 預(yù)變性 5min
94 oC 變性 30 sec
30個循環(huán) 63 oC 復(fù)性 30 sec
72 oC 延伸 1.5min
72 oC 延伸 5 min
- PCR反應(yīng)完成后加入loading buffer，用無核酸染料瓊脂糖凝膠（2%）電泳檢測15 µL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物 (120 V，45 min)。電泳完后泡膠染色30min。5種致瀉大腸埃希氏菌的檢測結(jié)果如下圖所示。
6. 注意事項：
試劑使用前建議短暫離心后開啟。
PCR反應(yīng)液請在冰中配制，以增強(qiáng)檢測的特異性。
