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產(chǎn)品說明
CSPP多重PCR檢測試劑盒可同時檢測空腸彎曲菌(C. jejuni)，結(jié)腸彎曲菌(C. coli)，海鷗彎曲菌(C. lari)，烏普薩拉彎曲菌(C. upsaliensis)，和胎兒彎曲菌胚胎亞種(C. fetus subsp. fetus)等5種常見的彎曲菌屬致病細菌。
產(chǎn)品組成 （50次，20 µL PCR）
組分 | 數(shù)量 | 體積 |
Master Mix （2X） * | 1管 | 500 µL |
Primer Mix | 1管 | 200 µL |
陽性對照 | 1管 | 50 µL |
H2O | 1管 | 1 mL |
* Master Mix （2X）含有Taq DNA聚合酶， dNTP，含MgCl2的PCR優(yōu)化反應(yīng)緩沖液，以及電泳時所必需的色素試劑。使用頻率高時一旦融解請于4oC保存或分裝保存。
儲存條件
-20oC長期保存。多次反復(fù)凍融會降低檢測效率。
使用說明
- DNA樣本處理、反應(yīng)體系配制、核酸擴增和結(jié)果鑒定等各步驟應(yīng)分域進行，以避免交叉污染。
- 細菌基因組DNA可使用市售試劑盒提取，也可按以下方法快速制備：
- 從平板上挑取適量菌落，加入含有200 µL ddH2O的滅菌離心管中，渦旋震蕩混勻，肉眼可見菌液渾濁即可。
- 菌液煮沸10 min，冷卻至室溫后，13,000 rpm離心2 min。
- 將上清移至新離心管中，即得可用于本試劑盒檢測的細菌DNA模板。
- PCR反應(yīng)液配制：
2 X Master Mix 10 µL
Primer Mix 4 µL
陽性對照/樣品DNA 2 µL
H2O 4 µL
反應(yīng)終體積 20 µL
- PCR反應(yīng)條件：
95oC 預(yù)變性 6 min
95 oC 變性 30 sec
30個循環(huán) 59 oC 復(fù)性 30 sec
72 oC 延伸 30 sec
72 oC 延伸 7 min
- 瓊脂糖凝膠（2%）電泳檢測15 µL PCR擴增產(chǎn)物 (100 V，50 min)。5種彎曲菌屬細菌的檢測結(jié)果如下圖所示，其中23S rRNA作為擴增反應(yīng)的內(nèi)參照，在所檢測的5種彎曲菌屬細菌均應(yīng)可見其大小為650 bp的擴增片段。陽性對照應(yīng)可見6條大小不同的擴增片段。
- 注意事項：
試劑使用前建議短暫離心后開啟。
PCR反應(yīng)液請在冰中配制，以增強檢測的特異性。
本試劑盒中Master Mix包含電泳所必需的試劑，PCR反應(yīng)后可直接電泳。
