17.測定BOD5時(shí)制取稀釋水的注意事項(xiàng)
稀釋水的質(zhì)量對BOD5的測定結(jié)果的準(zhǔn)確性意義重大，因此要求稀釋水空白5日耗氧必須小于0.2mg/L，好能控制在0.1mg/L以下，接種稀釋水5日耗氧應(yīng)在0.3~1.0mg/L之間。
保證稀釋水質(zhì)量的關(guān)鍵在于控制其有機(jī)物的含量低和抑制微生物繁殖的物質(zhì)含量低，因此好使用蒸餾水作為稀釋水，不宜使用離子交換樹脂制得的純水作為稀釋水，因?yàn)槿ルx子水往往含有從樹脂中分離出的有機(jī)物。如果制備蒸餾水的自來水中含有某些揮發(fā)性有機(jī)物，為預(yù)防其殘留在蒸餾水中，就應(yīng)在蒸餾前進(jìn)行去除有機(jī)物的預(yù)處理。由金屬蒸餾器制得的蒸餾水，應(yīng)注意檢查其中的金屬離子含量，以免發(fā)生抑制微生物的繁殖和代謝，影響B(tài)OD5測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。
如果所用稀釋水因含有有機(jī)物而不符合使用要求時(shí)，可采取加入適量曝氣池接種液后，在室溫或20oC條件下貯存一定時(shí)間的方法予以消除影響。接種的量以5d耗氧約0.1mg/L為原則，為防止藻類繁殖，貯存必須在暗室中進(jìn)行。如果貯存后的稀釋水有沉渣，只能取用上清液，可過濾去除沉渣。
為確保稀釋水的溶解氧接近飽和，必要時(shí)可用真空泵或水射器吸入經(jīng)凈化的空氣，也可用微型空壓機(jī)注入經(jīng)凈化的空氣，還可用氧氣瓶通入純氧，然后將經(jīng)過充氧的稀釋水在20oC培養(yǎng)箱中放置一定時(shí)間，使溶解氧達(dá)到平衡。冬季在較低室溫放置的稀釋水可能含有過多的溶解氧，夏季高溫季節(jié)則恰好相反，因此在室溫與20oC有明顯差別時(shí)，一定要放置在培養(yǎng)箱內(nèi)穩(wěn)定一段時(shí)間，使之和培養(yǎng)環(huán)境的氧分壓平衡。
18.測定BOD5時(shí)如何確定稀釋倍數(shù)
稀釋倍數(shù)過大或過小，可導(dǎo)致5d耗氧量太少或太多，超出正常耗氧范圍使實(shí)驗(yàn)失敗。而由于BOD5的測定周期很長，一旦出現(xiàn)此類情況，就無法以原樣補(bǔ)測。因此，必須十分重視稀釋倍數(shù)的確定。
工業(yè)廢水的組分雖然復(fù)雜，但其BOD5值與CODCr值之比通常在0.2～0.8之間，造紙、印染、化工等廢水比值較低，食品工業(yè)廢水則較高。一些含有顆粒狀有機(jī)物的廢水如酒糟廢水等，在測定其BOD5時(shí)，會由于顆粒物沉淀于培養(yǎng)瓶底不能參加生化反應(yīng)，造成比值明顯偏低。
稀釋倍數(shù)的確定是按測定BOD5時(shí)，5d耗氧應(yīng)大于2mg/L、剩余溶解氧大于1mg/L這兩個(gè)條件為原則。稀釋后當(dāng)日培養(yǎng)瓶中的DO為7～8.5mg/L，假設(shè)5d耗氧量為4mg/L，則稀釋倍數(shù)為CODCr值分別與0.05、0.1125、0.175三個(gè)系數(shù)的乘積。例如用250mL培養(yǎng)瓶測定CODCr為200mg/L的水樣BOD5時(shí)，三個(gè)稀釋倍數(shù)分別為：①200×0.005=10倍，②200×0.1125=22.5倍，③200×0.175=35倍。如果采用直接稀釋法，則取水樣的體積分別為：①250÷10=25mL，②250÷22.5≈11mL，③250÷35≈7mL。
照此取樣培養(yǎng)，將有1～2個(gè)測得的溶解氧結(jié)果符合上述兩個(gè)原則。如果有兩個(gè)稀釋比符合上述原則，計(jì)算結(jié)果時(shí)，應(yīng)取其平均值。如果剩余的溶解氧小于1mg/L、甚至為零時(shí)，應(yīng)加大稀釋比。如果培養(yǎng)期間溶解氧消耗量小于2 mg/L，一個(gè)可能是稀釋倍數(shù)過大；另一個(gè)可能是微生物菌種不適應(yīng)、活性差，或有毒物質(zhì)的濃度過大，此時(shí)還可能出現(xiàn)稀釋倍數(shù)大的培養(yǎng)瓶消耗溶解氧反而較多的現(xiàn)象。
如果稀釋水為接種稀釋水，由于空白水樣耗氧為0.3～1.0mg/L，所以稀釋系數(shù)分別為0.05、0.125和0.2。
如果已知水樣CODCr具體值或大概范圍，可以較容易地按上述稀釋倍數(shù)去分析其BOD5值。當(dāng)不知道水樣的CODCr范圍，為了縮短分析時(shí)間，可在測定CODCr過程中進(jìn)行估算。具體做法是：首先配制每升中含有0.4251g鄰苯二甲酸氫鉀的標(biāo)準(zhǔn)溶液(此液CODCr值為500mg/L)，然后按比例稀釋成CODCr值分別為400mg/L、300mg/L、200mg/L、100mg/L的稀溶液。分別移取20.0mLCODCr值為100mg/L～500mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按常法加入試劑，進(jìn)行CODCr值測定。加熱煮沸騰回流30min后，自然冷卻到常溫再加蓋保存，制成標(biāo)準(zhǔn)比色系列。按照常法測定水樣的CODCr值過程中，當(dāng)煮沸回流進(jìn)行到30min時(shí)，用預(yù)熱后的標(biāo)準(zhǔn)CODCr值色列進(jìn)行對比，估算出水樣的CODCr值，依此確定化驗(yàn)BOD5時(shí)的稀釋倍數(shù)。對含有難消解有機(jī)物的印染、造紙、化工等工業(yè)廢水，必要時(shí)在煮沸回流到60min時(shí)再進(jìn)行比色估算。
測定BOD5時(shí)水樣稀釋法分一般稀釋法和直接稀釋法兩種，其中一般稀釋法需要使用的稀釋水或接種稀釋水?dāng)?shù)量較多。
一般稀釋法是在1L或2L量筒中，加入稀釋水或接種稀釋水約500mL，然后加入計(jì)算而得的一定體積的水樣，再加稀釋水或接種稀釋水到滿量程，用末端裝有橡皮圓片的玻璃棒在水面下慢慢作上提或下沉式攪動(dòng)，后用虹吸管將已經(jīng)混合均勻的水樣溶液引入培養(yǎng)瓶中，并使充滿溢出少許，小心蓋緊瓶塞，并水封瓶口。對第二或第三個(gè)稀釋倍數(shù)的水樣，可利用剩余的混合液，經(jīng)計(jì)算后在添加一定量的稀釋水或接種稀釋水，用同樣的方法混合并引入培養(yǎng)瓶。
直接稀釋法是先以虹吸法在已知容積的培養(yǎng)瓶中引入約一半容積的稀釋水或接種稀釋水，然后沿瓶壁注入根據(jù)稀釋倍數(shù)計(jì)算出的每一培養(yǎng)瓶中應(yīng)加入的水樣體積，再引入稀釋水或接種稀釋水至瓶頸，小心蓋緊瓶塞，并水封瓶口。
使用直接稀釋法時(shí)，特別要注意后引入稀釋水或接種稀釋水時(shí)一定不能過快。同時(shí)要摸索引入適體積的操作規(guī)律，避免過量溢出而產(chǎn)生的誤差。
無論使用哪中方法，在將水樣引入培養(yǎng)瓶時(shí)，動(dòng)作必須要輕緩，避免發(fā)生氣泡，以防空氣溶入水中或水中氧氣溢出。同時(shí)要保證在蓋緊瓶蓋時(shí)一定要細(xì)心，避免瓶內(nèi)留有氣泡而影響測定結(jié)果。培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時(shí)，每天都要檢查其水封情況，及時(shí)填水，以防止封口水份蒸干而使瓶內(nèi)進(jìn)入空氣。此外，5d前后使用的兩個(gè)培養(yǎng)瓶的體積必須相同，以減小誤差。
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