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1.費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌原液制備：

菌液的制備：將合格的傷寒桿菌H菌株接種于普通瓊脂的克氏瓶或大試管內(nèi)37℃孵育18—24小時。肉眼觀察有無雜菌生長，必要時作鏡檢。用無菌甲醛生理鹽水洗下菌苔，將洗下液體裝入無菌試管內(nèi)，置37℃恒溫箱18—24小時以殺菌。得到原液。用作無菌試驗(yàn)即將菌液接種于肉湯及瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)4天，無活菌生長者才可使用。

菌液的制備：將合格的傷寒桿菌菌株依上法培養(yǎng)后，用無菌0.5%石灰酸鹽水將菌苔洗下，洗液裝入無菌試管置于37℃溫箱中18—24小時殺菌得原液。經(jīng)檢查無菌時可以使用(如無傷寒桿菌菌株也可用菌株制備抗原。即用0.5%石灰酸生理鹽水洗下菌液置100℃水浴60分鐘，破壞其H抗原即為O菌液。

2.費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌應(yīng)用液的制備：

合格的原液用標(biāo)準(zhǔn)比濁管計算含菌落數(shù)目后，用生理鹽水稀釋至每毫升含菌10億。是為了應(yīng)用液加入適量甲醛使其為0.25%，制備好的原液及應(yīng)用液均保存在2—10℃冰箱中備用，有效期為1年。

菌液濃度的計算及稀釋法：

菌液的濃度可用標(biāo)準(zhǔn)比濁法來測定，方法如下：

(1)分別配制1%硫酸溶液及1%氯化鋇溶液

(2)取口徑相等質(zhì)地相同的試管10支，依下表所示分別將硫酸及氯化鋇溶液加入，封固管口，費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌注明號碼備用。