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          醋酸菌培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)操作方法

          閱讀:4711      發(fā)布時(shí)間:2017-4-1
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          1.青海發(fā)光桿菌醋酸菌斜面培養(yǎng)基:葡萄糖 1克,酵母膏1克,碳酸鈣1克,瓊脂2.5克,水100毫升

           
          2.斜面培養(yǎng)斜面制作:培養(yǎng)基按配方調(diào)配好(碳酸鈣先不加入),分裝試管,滅菌備用。碳酸鈣按比例分裝、滅菌。擺斜面前將培養(yǎng)基和碳酸鈣混合,用手搓均勻,然后擺斜面,備用
           
          3.  Acetobacter Medium (醋酸菌培養(yǎng)基)
          Glucose (葡萄糖) 100g
          Yeasst extract (酵母膏) 10g
          CaCO3 20g Agar (瓊脂) 15g
          Distilled water (蒸餾水) 1000ml
          Adjust (調(diào)) pH to 6.8
          適用范圍:惡臭醋酸桿菌混濁變種
           
           3.1 斜面培養(yǎng)基
          葡萄糖8g,酵母粉10g碳酸鈣5g瓊脂15~20g水1000mLpH5.5,分裝試管。0.IMPa滅菌20min。95%酒精(食用級(jí))40mL。擺斜面,
           
          3.2 液體增殖培養(yǎng)基
          葡萄糖10g 酵母粉10g pH5.5水1000mL滅菌后加入酒精(食用級(jí))40mL 0.1MPa滅菌20min。
           
          3.3 醋酸菌種的制備
          青海發(fā)光桿菌擴(kuò)大培養(yǎng)過(guò)程:安瓿管,液體試管1.液體試管2,100mL三角瓶,500mL三角瓶,1000mL三角瓶,種子罐。
           
          3.3.1 安瓿管開啟:酒精棉球擦抹三次,用重器撞擊,打開,注入0.5mL無(wú)菌水,將菌球溶解,全部注入裝有10mL液體培養(yǎng)基的18×180試管1內(nèi),30℃培養(yǎng)72h,每2h搖動(dòng)—次
           
          3.3.2 菌體生長(zhǎng):培養(yǎng)基變混濁后,顏色變淺,對(duì)光觀察搖動(dòng)時(shí)有云霧狀金屬光澤。每只裝有10mL液體培養(yǎng)基的試管2接入lmL或0.5mL菌液,30℃培養(yǎng)48h,每2h搖動(dòng)—次。
           
          3.3.3 三角瓶三級(jí)擴(kuò)培,三角瓶中培養(yǎng)基的裝量為50%,每級(jí)按種量在10%左右,在轉(zhuǎn)換振蕩器上恒溫培養(yǎng),培養(yǎng)溫度均為30℃,時(shí)間依次縮短為36、36、24h,
           
          3.3.4 種子罐培養(yǎng)基同前 配料后種子罐夾套加熱滅菌100℃保持15min,冷卻后,先加入4%食用酒精,無(wú)菌操作接入菌種。接種量為10%~12%,溫度保持在30℃±1℃,通無(wú)菌空氣,菌體生長(zhǎng)時(shí)間為24~36h.視菌體生長(zhǎng)情況及鏡檢結(jié)果而定
           
          3.3.5 青海發(fā)光桿菌每次接種前,先將菌種進(jìn)行外觀觀察 。有異樣情況者,作涂片、染色、鏡檢觀察,菌體生長(zhǎng)不正?;蛉揪娜瞧坎坏檬褂?。外觀正常者抽檢2—3個(gè)樣品,在確保菌株純度、無(wú)污染的情況下轉(zhuǎn)入下一級(jí)菌種擴(kuò)培。培養(yǎng)醋酸菌時(shí),需要用含糖或酵母膏(維生素B)的培養(yǎng)基,在肉湯蛋白胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不良。大多數(shù)菌株可用六碳糖和甘油作為碳源,對(duì)甘露醇和葡萄糖酸鹽很少能利用或不能利用,不分解乳糖、糊精和淀粉。醋酸菌不形成芽孢,一般為形態(tài)近于球菌的短桿菌。醋酸菌可在PH4.3以下繁殖,增殖時(shí)多在液面成膜。幼齡細(xì)胞呈G-,老齡細(xì)胞呈可變性,因而染色只用來(lái)作為鑒定時(shí)的參考因素。
           

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