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產品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10 T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 11141ES10 | 應用領域 | 化工,生物產業(yè),地礦 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) | 11141ES10 | 10 T | 326.00 |
Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) | 11141ES60 | 100 T | 798.00 |
產品描述
Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)基于Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase而開發(fā)的即用型預混液。與Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase相比，Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase熱穩(wěn)定性大幅度提高，可耐受高達60℃的反應溫度，適合具有復雜二級結構的RNA模板的逆轉錄。同時，該酶增強了與模板的親和力，非常適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉錄。
該預混液包含5×gDNA digester Mix和4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus。5×gDNA digester Mix可去除RNA模板中殘留的基因組DNA污染，保證后續(xù)結果更加可靠。4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus 含有逆轉錄反應所需的所有組分（Buffer，dNTP，Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase，RNase inhibitor，Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix），只需加入RNA模板和 RNase-free H2O即可進行逆轉錄反應，并同時終止gDNA digester的作用，保證cDNA的完整性。
該產品適用于兩步法RT-qPCR檢測，針對qPCR進行特別優(yōu)化，比例優(yōu)化的Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix，使cDNA合成可從RNA轉錄本的各個區(qū)域起始，并具有相同的逆轉錄效率，保證了qPCR結果的真實性和可重復性。逆轉錄產物兼容SYBR®Green和探針法qPCR，可以根據實驗目的，選擇Hieff UNICON® qPCR SYBR® Green Master Mix，Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix或Hieff® qPCR TaqMan Probe Master Mix等試劑配合使用，進行高性能的基因表達分析。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規(guī)格 | |
11141ES10 (10 T) | 11141ES60 (100 T) | ||
11141-A | RNase-free H2O | 1 mL | 2×1 mL |
11141-B | 5×gDNA digester Mix | 30 μL | 300 μL |
11141-C | 4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus | 50 μL | 500 μL |
【注】：4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus含有gDNA digester抑制劑。
產品應用
適用于兩步法RT-qPCR。
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃保存。有效期18個月。
注意事項
1）5×gDNA digester Mix和4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus含有高濃度的甘油，使用前請短暫離心收集到反應管底部，并用移液槍輕輕吸打充分混勻后，準確吸取；
2）如果加入RNA模板體積較大 (如超過2 μL)，請確保RNA是溶于水中而不是TE中，因為TE會對gDNA去除以及逆轉錄反應產生抑制；
3）可以不經過基因組去除步驟，直接用4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus進行逆轉錄，這樣所得到的結果會與使用Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (Cat .11137ES) 效果一致。但是請勿將gDNA digester與11137ES中的Hifair® Ⅲ SuperMix配套使用，因其不含終止gDNA digester反應的成分，會影響反轉錄和后續(xù)的qPCR實驗；
4）反應液的配制應在冰上操作完成，操作過程應避免RNase污染；
5）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作；
6）本產品僅作科研用途！
第一鏈cDNA合成操作步驟
1. 殘留基因組DNA去除
在RNase free離心管中配制如下混合液，用移液器輕輕吹打混勻。42℃孵育2 min。
組分 | 使用量 |
RNase-free H2O | To 15 μL |
5×gDNA digester Mix | 3 μL |
Total RNA | 10 pg -5 μg* |
or mRNA | 10 pg-500 ng* |
【注】：* 20 μL逆轉錄反應體系建議Total RNA的投入量不超過1 μg。如果目的基因的表達豐度低，最多投入5 μg Total RNA，否則RNA投入量過高，可能會超過后續(xù)定量PCR的線性范圍。
2. 逆轉錄反應體系配制（20 μL體系）
在第1步的反應管中直接加入4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus，用移液器輕輕吹打混勻。
組分 | 使用量 |
第1步的反應液 | 15 μL |
4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus | 5 μL |
3.逆轉錄程序設置
溫度 | 時間 |
25℃ | 5 min |
55℃ | 15 min |
85℃ | 5 min |
【注】：逆轉錄溫度：推薦使用55℃。對于高GC含量模板或者復雜模板，可將逆轉錄溫度提高到60℃。
※ 逆轉錄產物可立即用于qPCR反應，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復凍融。
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