豬胰島素樣因子1（IGF-1）ELISA試劑盒原理

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中豬胰島素樣生長因子1（IGF-1）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被豬胰島素樣生長因子1（IGF-1）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬胰島素樣生長因子1（IGF-1）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

豬胰島素樣因子1（IGF-1）ELISA試劑盒原理主要優(yōu)點

 1.高效、靈敏、特異的抗體；

 2. 穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；

 3. 吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；

 4. 適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；

 5. zui大限度的節(jié)省實驗經(jīng)費。

常用的使用方法

一、雙抗體夾心法測定抗原

將抗原免疫*種動物獲得的抗體吸附于固相表面;

加抗原，形成抗原-抗體復(fù)合物;

加抗原免疫第二種動物獲得的抗體，形成抗體抗原抗體復(fù)合物;

加酶標(biāo)抗抗體(第二種動物抗體的抗體);

加底物。底物的降解量＝抗原量。

二、直接法測定抗原

將抗原吸附在載體表面；

加酶標(biāo)抗體，形成抗原—抗體復(fù)合物；

加底物。底物的降解量＝抗原量。

三、間接法測定抗體

將抗原吸附于固相載體表面；

加抗體, 形成抗原-抗體復(fù)合物；

加酶標(biāo)抗體；

加底物。 測定底物的降解量＝抗體量。

問題解答

靈敏度是什么意思？

根據(jù)我司多年來的銷售經(jīng)驗，我司了解到客戶針對購買Elisa試劑盒時，靈敏度要求非常高。這是為什么呢？為您解析Elisa試劑盒靈敏度。Elisa試劑盒靈敏度高能使產(chǎn)品達到一定的數(shù)值，對產(chǎn)品試驗有著非常大利益，它能檢測到的分析物的zui小量，表示檢測下限的能力。

相對靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%

測定方法及表示方法：靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控血清、陽性標(biāo)本稀釋終點、血清盤（pannel）及臨床標(biāo)本陽性率。

靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品可以從衛(wèi)生部臨檢中心購買，質(zhì)控血清可以從衛(wèi)生部臨檢中心購買，也可以自己配制。因為質(zhì)控血清不一定是原倍血清，或由于片段、亞型、位點等原因，評定試劑盒的靈敏度都帶有一定的片面性。

陽性標(biāo)本稀釋終點的方法常用于不同試劑盒的比較，但也有上述的片面性。陽性pannel有些可以從衛(wèi)生部臨檢中心購買，如HBsAg陽性pannel，也可以自己配制。臨床標(biāo)本陽性率，是一種粗略的估計，但對臨床很實用。

注意事項

1. 由于產(chǎn)品底物顯色劑對光及其敏感，因此要避光保存。

2. 檢測吸光度前應(yīng)將酶標(biāo)儀打開，將其預(yù)熱30min以上。

3. 孵育的時間應(yīng)該嚴格按照試劑盒說明書上的時間為準(zhǔn)。

4. 要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。

5. 對樣本的結(jié)果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。

結(jié)果計算：

在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為X軸，相應(yīng)的OD值為Y軸，用四參數(shù)或?qū)?shù)-對數(shù)法繪制zui合適的標(biāo)準(zhǔn)曲線。濃度與OD值成反比關(guān)系，隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加，黃色強度就減少，即OD值減少樣本濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取。如果樣本實驗前進行了稀釋，則試劑盒zui后結(jié)果應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋因子標(biāo)準(zhǔn)曲線為逆向S型曲線。

附：采用全自動酶標(biāo)儀檢測，只需檢測前設(shè)置好酶標(biāo)儀的相關(guān)參數(shù)，如坐標(biāo)參數(shù)（線性，半對數(shù)）和計算方式參數(shù)（三次回歸、四參數(shù)或雙對數(shù)曲線方程），即可直接得到結(jié)果。

產(chǎn)品名稱存放：收到貨后貯存于4℃，強烈建議盡快使用配制的試劑1X緩沖液貯存于4℃，將不用的微孔板放回至密封袋內(nèi)密封起來，貯存于4℃，已稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品，生物標(biāo)記物，抗體和HRP貯存于4℃。