繼ZFN（Zinc Finger Nucleases）技術(shù)后，Merck在2013年推出新一代基因組編輯工具--CRISPR/Cas9，讓研究人員以更快、更經(jīng)濟(jì)的方式實(shí)現(xiàn)基因組特定位點(diǎn)的編輯。憑借過去10年在基因組編輯領(lǐng)域的豐富經(jīng)驗(yàn)積累以及專業(yè)的生物信息學(xué)平臺，Merck已經(jīng)成功設(shè)計(jì)出覆蓋人類，小鼠和大鼠三個物種的所有基因的CRISPR/Cas9載體，并可以提供在線定制服務(wù)，以及完整的CRISPR實(shí)驗(yàn)workflow解決方案。此外，默克與Sanger Institute合作開發(fā)了人、小鼠全基因組CRISPR 文庫，以幫助科學(xué)家實(shí)現(xiàn)基因功能的快速篩選、規(guī)?；哪Ｐ徒⒁约八幬镒饔煤Y選等。

• 高效：優(yōu)化的載體設(shè)計(jì)，大限度提高轉(zhuǎn)染效率，簡化篩選工作
• 特異：特殊的gRNA設(shè)計(jì)和雙切口酶系統(tǒng)，大限度提高特異性
• 全面：產(chǎn)品齊全，可提供質(zhì)粒、RNA、慢病毒載體、RNP等形式，涵蓋人、大鼠、小鼠、植物等多個物種，更有Sanger Arrayed和Broad Pools全基因組文庫以及重要通路的亞文庫
• 掌控：強(qiáng)大的慢病毒全基因組文庫可輕松進(jìn)行高通量篩選，全面掌控人或小鼠的基因組

CRISPR/Cas9 基因編輯工具

• Sanger Arrayed Lentiviral CRISPR   Libraries • Lentiviral CRISPR Pools Libraries • CRISPR/Cas9單載體表達(dá)系統(tǒng) • CRISPR Cas9-D10A雙切口酶系統(tǒng) • SygRNA® Cas9 RNP系統(tǒng) • CRISPR/Cas9基因激活表達(dá)載體 • CRISPR/Cas9在植物中的應(yīng)用 • Cas9蛋白 • CRISPR對照 (DNA and Virus)

CAS9D10AP Sigma

CRISPR Cas9-D10A 切口酶質(zhì)粒

CRISPR Cas9-D10A Nickase Plasmid

別名: CAS9D10A 質(zhì)粒

• 性質(zhì)

產(chǎn)品描述

Components

1管含1μg 的Cas9-D10A 切口酶質(zhì)粒。

請注意，該產(chǎn)品不含向?qū)NA序列。向?qū)NA必須通過定制CRISPR產(chǎn)品選項(xiàng)卡單獨(dú)購買。

Preparation Note

Sigma CRISPR質(zhì)粒產(chǎn)品為小量提取包裝，可能不適用于轉(zhuǎn)染到特殊類型的細(xì)胞中。為得到佳結(jié)果，我們建議在轉(zhuǎn)染前使用無內(nèi)毒素的DNA純化試劑盒大量提取質(zhì)粒。

Physical form

Sigma Cas9-D10A切口酶質(zhì)粒的產(chǎn)品形式是濃度為20ng/μl的50µl溶液。

Application

功能性基因組學(xué)/靶點(diǎn)驗(yàn)證 

• 在多種細(xì)胞系中進(jìn)行基因敲除
• 對不適合于RNAi的基因進(jìn)行*敲除
• 建立基因敲入細(xì)胞系，將啟動子、融合標(biāo)簽或報告基因整合到內(nèi)源性基因中

   

  Features and Benefits

  Cas9-D10A單個載體的應(yīng)用可延伸至所有U6-向?qū)NA質(zhì)粒。為優(yōu)化Cas9與向?qū)NA的比例，可改變Cas9和向?qū)NA的用量。新證據(jù)表明，CRISPR內(nèi)切酶的脫靶效應(yīng)是一個重要問題。為了解決這一問題，Sigma開發(fā)的配對切口酶技術(shù)可將CRISPR DNA識別域的長度延長至與ZFN和TALEN相近。我們的經(jīng)驗(yàn)表明，基于Cas9-D10A突變體的配對切口酶是可靠的。我們的開發(fā)工作也證明，產(chǎn)生活性配對切口酶的關(guān)鍵因素在于gRNA在5’至5’方向上的定位。對于配對CRISPR切口酶質(zhì)粒的遞送，我們建議使用由Cas9-D10A 表達(dá)載體和2個U6驅(qū)動型gRNA組成的三元系統(tǒng)。為了簡化配對切口酶的使用，可通過Sigma的在線工具進(jìn)入預(yù)設(shè)計(jì)配對切口酶庫。請查看Sigma在線CRISPR產(chǎn)品，獲取新設(shè)計(jì)方案集。

  Principle

  CRISPR/Cas是細(xì)菌和古細(xì)菌的一種防御系統(tǒng)，可用來對抗入侵的病毒和質(zhì)粒。來自釀膿鏈球菌的II型CRISPR/Cas系統(tǒng)包含兩種分子元件，即一個Cas9蛋白和一個非編碼向?qū)NA（gRNA），該系統(tǒng)經(jīng)過基因改造而被用于真核系統(tǒng)中。Cas9核酸內(nèi)切酶可在單個gRNA的引導(dǎo)下，在基因組位置上引入DNA雙鏈斷裂（DSB）。與鋅指核酸酶（ZFN）誘導(dǎo)的DSB相似，細(xì)胞隨后會激活內(nèi)源性DNA修復(fù)程序，即非同源性末端接合（NHEJ）或同源重組修復(fù)機(jī)制（HDR），對目標(biāo)DSB進(jìn)行修復(fù)。

  General description

  CRISPR Cas9-D10A切口酶表達(dá)質(zhì)粒使用CMV啟動子，可獲得較強(qiáng)的Cas9瞬時表達(dá)。您可以使用MluI和NheI酶切將CMV替換為其它啟動子。同時，使用XbaI酶切可使Cas9-D10A表達(dá)質(zhì)粒線性化，得到基于T7的mRNA產(chǎn)物。

  Legal Information

  CRISPR正在申請中

  Other Notes

  為了介導(dǎo)DNA位點(diǎn)特異性雙鏈斷裂，必須與兩條U6-gRNA質(zhì)粒一起使用。 
  
  文獻(xiàn)中使用的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染濃度范圍為≥1.0 ug/μl且≤5 uL的Cas9-D10A 質(zhì)粒結(jié)合≥1.0 ug/μl且≤5 ul的U6-gRNA質(zhì)粒。（上述所有濃度均假設(shè)是對0.5~1百萬個細(xì)胞進(jìn)行核轉(zhuǎn)染）