LONZA熒光內(nèi)毒素檢測系統(tǒng)

（重組C因子法）

配置清單：熒光讀數(shù)儀、電腦及軟件、重組C因子試劑盒

重組C因子內(nèi)毒素檢測歷程：

2012年6月，F(xiàn)DA將重組C因子法納入可替代方法；

2015年7月，歐洲藥典將重組C因子法納入可替代方法；

2018年9月，F(xiàn)DA批準(zhǔn)了首以重組C因子檢測內(nèi)毒素的單抗藥；

2018年12月，歐洲藥典征求意見稿將重組C因子納入歐洲藥典；

2019年1月，中國藥典征求意見稿將重組C因子納入2020版中國藥典；

2019年12月，歐洲藥典將重組C因子納入到新一版的歐洲藥典中，預(yù)計2021年生效。

什么是細(xì)菌內(nèi)毒素？

1、是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁的產(chǎn)物。細(xì)菌在生活狀態(tài)時不釋放出來，只有當(dāng)細(xì)菌死亡自溶或粘附在其它細(xì)胞時，才表現(xiàn)其毒性，內(nèi)毒素的主要化學(xué)成分是脂多糖中的類脂A成分。

2、經(jīng)消化道進(jìn)入無危害，大量進(jìn)入血液就會引起發(fā)熱反應(yīng)-“熱原反應(yīng)”，會激活多種炎癥信號通路。因此對于所有的注射用品，植入式醫(yī)療器械均需要進(jìn)行內(nèi)毒素檢測。

3、理化性質(zhì)：內(nèi)毒素不是蛋白質(zhì)，因此非常耐熱。只有在160℃的溫度下加熱2到4個小時，或用強(qiáng)堿、強(qiáng)酸或強(qiáng)氧化劑加溫煮沸30分鐘才能破壞它的生物活性。

4、生物制品(細(xì)胞制劑，藥品，疫苗)無法通過這些方法去除熱源 → 必須在整個生產(chǎn)過程中保證所有物料內(nèi)毒素的含量，以滿足終產(chǎn)品的內(nèi)毒素含量符合放行標(biāo)準(zhǔn) → 內(nèi)毒素檢測

熒光內(nèi)毒素檢測系統(tǒng)

Lonza內(nèi)毒素檢測

※ Lonza內(nèi)毒素檢測始于1976年，44年為客戶提供可靠的內(nèi)毒素產(chǎn)品和服務(wù)

※ 上市動態(tài)檢測法

※ 上市重組C因子

※ Lonza提供專業(yè)的內(nèi)毒素解決方案，服務(wù)對象覆蓋70%的制藥*企業(yè)，市場上大量的藥物是通過lonza內(nèi)毒素產(chǎn)品放行上市的

※ 市場的技術(shù)：

ü  鱟試劑+無動物源的重組C因子試劑檢測內(nèi)毒素

ü  全自動高通量內(nèi)毒素工作站PyroTec技術(shù)

ü  符合21CFR part 11和EU GMP 附錄11的內(nèi)毒素檢測分析軟件WinKQCL

Fluorescent Endpoint Test – PyroGene ™
重組C因子法

※ PyroGene™ Recombinant Factor C Assay 是無動物源性組分的 LAL 替代方法。已經(jīng)被 FDA 接受。此方法使用重組的 C 因子來代替鱟試劑級聯(lián)反應(yīng)的一個組分。與內(nèi)毒素結(jié)合后激活并切割一個合成底物，釋放出熒光分子。反應(yīng)在 96 孔板中進(jìn)行。在實(shí)驗(yàn)開始和經(jīng)一小時孵育后用熒光檢測儀（380Ex/440Em）進(jìn)行檢測。

※ 靈敏度：0.005-5EU/ml

※ 優(yōu)勢：

ü   通過消除假陽性反應(yīng)葡聚糖，達(dá)到更高的內(nèi)毒素特異性

ü   批次變化更小

ü   不使用動物制品

ü   確保供應(yīng)安全

ü   FDA 認(rèn)可的 LAL 替代方案

※ 所需的其他材料：

ü   帶孵育功能的熒光檢測儀

ü   WinKQCL™軟件- WinKQCL 5.3.3/6.0

ü   LAL 檢測用水（大包裝的試劑盒需要單獨(dú)購買）

ü   無致熱源檢測管

ü   LAL 檢測級別多孔板

軟件-WinKQCL software

•       好的內(nèi)毒素檢測和分析數(shù)據(jù)管理平臺-24年基于用戶體驗(yàn)持續(xù)改進(jìn)(1996年version 1.0本發(fā)布)

•       *符合21CFR Part 11數(shù)據(jù)完整性要求

•       全面的檢測分析，數(shù)據(jù)管理，和報告需求的完整解決方案

•       支持企業(yè)在內(nèi)為各個工廠提供管理和協(xié)作

•       對接第三方系統(tǒng)(MODA，LIMS，LIS)

•       兼容自動化工作站

目前提供兩個版本軟件 WinKQCL 5.3.3/6.0