大鼠血管內(nèi)皮細胞鈣粘蛋白(VE-cadherin)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書

• 貨　　號：YE02638
• 產(chǎn)　　地：進口/國產(chǎn)

    本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中血管內(nèi)皮細胞鈣粘蛋白(VE-cadherin)含量。

    實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠血管內(nèi)皮細胞鈣粘蛋白(VE-cadherin)水平。用純化的大鼠血管內(nèi)皮細胞鈣粘蛋白(VE-cadherin)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血管內(nèi)皮細胞鈣粘蛋白(VE-cadherin)，再與HRP標(biāo)記的血管內(nèi)皮細胞鈣粘蛋白(VE-cadherin)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管內(nèi)皮細胞鈣粘蛋白(VE-cadherin)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準曲線計算樣品中大鼠血管內(nèi)皮細胞鈣粘蛋白(VE-cadherin)濃度。

    大鼠血管內(nèi)皮細胞鈣粘蛋白(VE-cadherin)ELISA試劑盒組成：

    試劑盒組成48孔配置96孔配置 保存說明書1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1個1個酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準品：720ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存

    大鼠血管內(nèi)皮細胞鈣粘蛋白(VE-cadherin)ELISA試劑盒樣本處理及要求：

    1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

    2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

    3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

    4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

    5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

    6.標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。大鼠血管內(nèi)皮細胞鈣粘蛋白(VE-cadherin)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書

    大鼠血管內(nèi)皮細胞鈣粘蛋白(VE-cadherin)ELISA試劑盒操作步驟標(biāo)準品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)準品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為詳見說明書（業(yè)務(wù)人員可提供））。

    加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

    溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

    洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

    加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。溫育：操作同3。洗滌：操作同5。顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

    測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

    大鼠血管內(nèi)皮細胞鈣粘蛋白(VE-cadherin)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書注意事項：試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，*使用排槍加樣。請每次測定的同時做標(biāo)準曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

    計算：以標(biāo)準物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，

    在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準曲線，根據(jù)樣品的OD

    值由標(biāo)準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋

    倍數(shù)；或用標(biāo)準物的濃度與OD值計算出標(biāo)

    準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值

    代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋

    倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

    （此圖僅供參考）試劑盒性能：

    1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為（詳見說明書）以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于（詳見說明書） 檢測范圍： 詳見說明書（業(yè)務(wù)人員可提供） 保存條件及有效期：1.試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個月