小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中C肽（C-Peptide）含量的測定

    （本試劑盒僅供體外研究使用、不用于臨床診斷!）

    聲明：尊敬的客戶，感謝您選用本公司的產(chǎn)品。本產(chǎn)品選用世界生產(chǎn)廠家的原料，采用專業(yè)ELISAkit生產(chǎn)技術(shù)制造。適用于體外定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中天然和重組C-Peptide濃度。使用前請仔細(xì)閱讀說明書并檢查試劑組分！如有疑問，請及時上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司。

    1.小鼠C肽（C-Peptide）定量檢測試劑盒（ELISA）

    2.蒸餾水

    實驗設(shè)備

    1.37℃恒溫箱

    2.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

    3.精密移液器及一次性吸頭

    4.一次性試管

    5.吸水紙

    實驗步驟

    1.準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

    2.配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

    3.加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。

    4.溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

    5.洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）。

    6.加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL，空白對照孔不加。

    7.溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

    8.洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）。

    9.顯色：每孔先加入顯色劑A液50μL，再加入顯色劑B液50μL，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s），37℃避光顯色15min。

    10.終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

    11.測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。

    12.計算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值，計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

    注意事項

    1.樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。

    2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能立即試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    3.樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。

    4.實驗嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，實驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

    5.酶標(biāo)包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

    6.建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。

    7.牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。

    8.本試劑盒定量范圍為62.5-2000pg/mL，超過此范圍，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計算所得，不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準(zhǔn)確結(jié)果（62.5-2000pg/mL范圍內(nèi)），乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。

    9.若顯色過淺，可適當(dāng)延長底物溫育時間。

    10.為避免交叉污染，標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復(fù)使用封板膜。

    11.試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號的試劑不得混用。

    12.底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

    小鼠C肽（C-Peptide）定量檢測試劑盒引進(jìn)*的、便捷的、實驗技術(shù),擁有快速、簡單、準(zhǔn)確、靈敏度高的特點,貨期短,質(zhì)量優(yōu),現(xiàn)貨供應(yīng)。