細(xì)胞質(zhì)量決定實(shí)驗(yàn)的進(jìn)程與結(jié)果，相信很多小伙伴在細(xì)胞培養(yǎng)上走了不少?gòu)澛罚聦?shí)上因?yàn)榧?xì)胞污染而耽誤了實(shí)驗(yàn)進(jìn)度，影響畢業(yè)和發(fā)文章的進(jìn)程的事件時(shí)常發(fā)生。

　　所以今天小編整理了一下細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的一些現(xiàn)象與處理方法，希望可以幫到大家。

　　一、細(xì)菌污染

　　細(xì)菌污染最為常見，一旦操作稍有不當(dāng)，就會(huì)引起細(xì)胞污染，細(xì)菌污染后顯微鏡下觀察呈現(xiàn)有黑色細(xì)條沙狀，當(dāng)然，根據(jù)感染的細(xì)菌不同，所呈現(xiàn)的狀態(tài)也不盡相同，有球形、桿狀等，其次，培養(yǎng)液發(fā)黃，變渾濁，可明顯看見培養(yǎng)皿中有細(xì)沙狀的沉淀物，時(shí)不時(shí)還有異樣氣味發(fā)出，如下圖所示：

　　處理方法：
　　在培養(yǎng)基中加入抗生素處理，可以用四環(huán)素，慶大霉素，或者鏈霉素，前兩者的工作濃度是50 μg/mL;鏈霉素的工作濃度是100 μg/mL。但是，細(xì)胞本身也有影響，狀態(tài)大不如從前，所以，防范于未然，正確操作、嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作規(guī)范，定期清理消毒培養(yǎng)設(shè)施才是關(guān)鍵!
 

　　二、真菌污染

　　真菌污染培養(yǎng)液清亮透明，不會(huì)像細(xì)菌感染大爆發(fā)，所以很難早期發(fā)現(xiàn)，鏡下有時(shí)候象絲狀，有時(shí)候象珊瑚狀，慢慢地會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物，這個(gè)時(shí)候，已經(jīng)晚了，細(xì)胞很難救活了。

　　處理方法：趕緊扔掉，不要再想挽救，即使再珍貴。然后消毒滅菌培養(yǎng)間，CO2孵箱，器皿和培養(yǎng)液。
 

　　三、霉菌污染

　　同真菌感染一致，因?yàn)榕囵B(yǎng)液是清亮的，所以霉菌污染早期難以發(fā)現(xiàn)，等發(fā)現(xiàn)時(shí)往往已經(jīng)為時(shí)過晚了。培養(yǎng)液中慢慢地出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物，如同風(fēng)中柳絮，一般不仔細(xì)看發(fā)覺不出來。細(xì)胞仍可生長(zhǎng)，但時(shí)間一長(zhǎng)，細(xì)胞的狀態(tài)就變差，不再增長(zhǎng)。見下圖。

　　處理方法：建議果斷舍棄該污染細(xì)胞，將環(huán)境消毒，因?yàn)槊咕念B固可能會(huì)導(dǎo)致下幾批細(xì)胞都會(huì)污染，所以，采用酒精底地擦洗一遍CO2孵箱。然后再用新潔爾滅擦洗一遍，把水盤里加上飽和量的硫酸銅。千萬不可大意!
 

　　四、支原體感染

　　培養(yǎng)液變渾濁，支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯，只是細(xì)胞狀態(tài)變差、生長(zhǎng)變慢，在顯微鏡下觀察可能會(huì)有小黑點(diǎn)，但培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁。細(xì)胞傳代以后就出現(xiàn)細(xì)胞間黑點(diǎn)，細(xì)胞空泡化，很多類似凋亡、壞死的細(xì)胞，最終細(xì)胞漂浮，死亡。

　　處理方法：
　　如果不是很珍貴的細(xì)胞的話，建議直接扔了吧。還是那句話，預(yù)防為主，如果是珍貴的細(xì)胞的話，建議使用——支原體清除培養(yǎng)基。

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　　此款支原體清除培養(yǎng)基是在市面上已有的支原體清除培養(yǎng)基基礎(chǔ)上開發(fā)的新一代產(chǎn)品，含有清除支原體的特殊成分(一種混合制劑，可通過抑制DNA和支原體生長(zhǎng)所必須的相關(guān)蛋白合成來取得良好的支原體清除效果，挽救珍貴的細(xì)胞，減少因支原體污染帶來的損失)。

　　此產(chǎn)品經(jīng)過了數(shù)十種細(xì)胞的測(cè)試和長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，對(duì)細(xì)胞無害，對(duì)清除支原體污染效果好，能夠很好的抑制和殺滅支原體。并且安全可靠，工作濃度低，無細(xì)胞毒性。

　　使用支原體清除培養(yǎng)基處理污染細(xì)胞前后對(duì)比圖：

　　五、黑膠蟲污染

　　開始污染時(shí)對(duì)細(xì)胞無影響，當(dāng)數(shù)量達(dá)到一定程度時(shí)就會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生影響。400倍顯微鏡下可見點(diǎn)狀或片狀游動(dòng)小體，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會(huì)太影響，細(xì)胞還是可以用的。常常是細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，且觀測(cè)到的運(yùn)動(dòng)物無明顯增多，且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不會(huì)有明顯影響，在細(xì)胞增殖旺盛之后會(huì)自然消失，除更換血清外無須特殊處理。

　　處理方法：可以增加細(xì)胞的種板密度，以提高細(xì)胞的生存率，盡早處理細(xì)胞，越快越好。如果實(shí)在來不及了，推薦使用——黑膠蟲清除培養(yǎng)基

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　　使用黑膠蟲清除培養(yǎng)基理污染細(xì)胞前后對(duì)比圖：

　　溫馨提醒：

　　學(xué)會(huì)對(duì)各種污染情況的辨別和處理是一項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)技能，希望大家在看完我們的文章后結(jié)合你的實(shí)驗(yàn)操作，學(xué)會(huì)如何應(yīng)對(duì)細(xì)胞污染。

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