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          人核轉(zhuǎn)錄因子(NF-kB)ELISA檢測(cè)試劑盒使用說明書

          來源:上海研謹(jǐn)生物科技有限公司   2024年12月24日 12:30  

          本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷

          Human核轉(zhuǎn)錄因子NF-kBELISA檢測(cè)試劑盒

          使用說明書

          檢測(cè)原理

          試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包核轉(zhuǎn)錄因子NF-kB)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核轉(zhuǎn)錄因子NF-kB)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

          樣品收集、處理及保存方法

          1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

          2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

          3.  細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

          4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

          5.  保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

          自備物品

          1. 酶標(biāo)儀(450nm)

          2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

          3. 37℃恒溫箱

          操作注意事項(xiàng)

          1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

          2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

          3.  濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白;按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍,最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

          4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

          5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

          試劑盒組成

          名稱

          96孔配置

          48孔配置

          備注

          微孔酶標(biāo)板

          12孔×8條

          12孔×4條

          標(biāo)準(zhǔn)品

          0.3mL*6管

          0.3mL*6管

          樣本稀釋液

          6mL

          3mL

          檢測(cè)抗體-HRP

          10mL

          5mL

          20×洗滌緩沖液

          25mL

          15mL

          按說明書進(jìn)行稀釋

          底物A

          6mL

          3mL

          底物B

          6mL

          3mL

          終止液

          6mL

          3mL

          封板膜

          2張

          2張

          說明書

          1份

          1份

          自封袋

          1個(gè)

          1個(gè)

          注:標(biāo)準(zhǔn)品(S0-S5)濃度依次為:0、75150、300、600、1200 pg/mL

          試劑的準(zhǔn)備

           20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

          洗板方法

          1.  手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

          2.  自動(dòng)洗板機(jī):每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

          操作步驟

          1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

          2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

          3.  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

          4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

          5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

          6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

          7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

          結(jié)果判斷

           繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

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          試劑盒性能

          1.  準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。

          2.  靈敏度:最DI檢測(cè)濃度小于5.0 pg/mL。

          3.  檢測(cè)范圍:5.0-1200 pg/mL。

          4.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

          5.  重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

          6.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

          7.  有效期:6個(gè)月

          2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤(rùn)色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

          如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

           

          實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):

           


          免責(zé)聲明

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