培養(yǎng)基的滅菌應(yīng)根據(jù)供應(yīng)商提供的參數(shù)或用戶自己的驗證。買來的制備好的培養(yǎng)基應(yīng)提供其使用的滅菌方法的文件。理想的供應(yīng)商應(yīng)提供培養(yǎng)基的滅菌保證水平（SAL），此水平是依靠*的生物指示劑確定的。濕熱高壓滅菌器（高壓蒸汽滅菌器）是的滅菌技術(shù)，除了一些為避免培養(yǎng)基中的熱敏物質(zhì)遭到破壞而采用的煮沸方法。通過過濾滅菌對有些配方也是合適的。
       培養(yǎng)基的滅菌方法、滅菌條件的效果應(yīng)通過培養(yǎng)基的滅菌和促生長試驗來驗證。另外，如果通過濕熱滅菌，滅菌周期應(yīng)經(jīng)過驗證，對選擇合適的負(fù)載和體積來確保合適的熱分布。通常供應(yīng)商建議采用一個已校正過的高壓滅菌鍋，在121°滅菌15分鐘。通常指培養(yǎng)基達(dá)到溫度的時間。當(dāng)高壓滅菌鍋負(fù)載結(jié)構(gòu)影響加熱的速度是時，越多的負(fù)載就需要越長的滅菌周期。然而，滅菌的時間取決于培養(yǎng)基的體積和高壓鍋的負(fù)載。滅菌周期中，當(dāng)溫度是慢慢上升時，可能導(dǎo)致培養(yǎng)基的過度加熱。因此，必須仔細(xì)確認(rèn)能達(dá)到zui小的SAL要求的滅菌周期，在過度加熱時，抑制培養(yǎng)基降解的趨勢。在流體循環(huán)完成后，不主張放冷后的培養(yǎng)基中放在高壓滅菌鍋中貯存，因為這樣可能破壞培養(yǎng)基。不合適的加熱或滅菌（對買來的培養(yǎng)基或是內(nèi)部制備的培養(yǎng)基）可能導(dǎo)致顏色的不同變化，不透明，改變培養(yǎng)基的規(guī)格，或是PH發(fā)生漂移（與供應(yīng)商的提議范圍）。
 通過無菌技術(shù)為測試制備的每一批培養(yǎng)基其PH在放冷至室溫（25°）后，都應(yīng)測定。一個扁平的pH計用于培養(yǎng)基表面pH值的測定，浸入式的pH計用于液體的測定。各供應(yīng)商提供的培養(yǎng)基的pH應(yīng)該在規(guī)定的±0.2的范圍內(nèi)，除非通過驗證得到更寬的范圍。