一、熒光分析法的基本原理    
    處于基態(tài)的被測(cè)物質(zhì)的分子在吸收適當(dāng)能量，如光、化學(xué)、物理能后，其共價(jià)電子從成鍵分子軌道或非鍵分子軌道躍遷到反鍵分子軌道上去，形成分子激發(fā)態(tài)。分子激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定，將很快衰變到基態(tài)。在分子激發(fā)態(tài)返回到基態(tài)的同時(shí)常伴隨著光子的輻射。這種現(xiàn)象就是發(fā)光現(xiàn)象。熒光則屬于分子的光致發(fā)光現(xiàn)象。

二、熒光分光光度計(jì)的特點(diǎn)
   用熒光分析法分析的儀器，稱熒光分光光度計(jì)（熒光分析儀）。
    熒光分析法具有靈敏度高（比紫外、可見(jiàn)分光光度法高2~3個(gè)數(shù)量級(jí)），能提供激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、發(fā)射強(qiáng)度、特征峰值等信息，在生物、環(huán)保、醫(yī)學(xué)、藥物、石油勘探等諸多領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。本儀器不僅能直接、間接地分析眾多的有機(jī)化合物；另外，還可利用有機(jī)試劑間的反應(yīng)，進(jìn)行近70種無(wú)機(jī)元素的熒光分析。熒光的光譜特征是熒光光譜總是滯后于激發(fā)光譜即斯托克斯位移.

三、熒光強(qiáng)度與物質(zhì)濃度的關(guān)系
1．對(duì)于某種熒光物質(zhì)的稀溶液，在一定強(qiáng)度的激發(fā)光照射下，熒光物質(zhì)的發(fā)射強(qiáng)度與入射光的強(qiáng)度以及檢測(cè)器的放大倍數(shù)成正比，可以用以下公式表示：
          F=KIFC
          K-----與儀器系統(tǒng)有關(guān)的常數(shù)
          I-----入射光的強(qiáng)度
          F-----熒光物質(zhì)的熒光效率
          C-----熒光物質(zhì)的濃度
2．當(dāng)樣品濃度增大到一定值時(shí)，熒光強(qiáng)度與濃度就不成線性關(guān)系。
    原因一：樣品濃度較高時(shí)，液池前部的溶液強(qiáng)吸收則發(fā)生強(qiáng)的熒光，液池后半部的溶液不易受到入射光照，不發(fā)生熒光，所以熒光強(qiáng)度反而降低。
    原因二：在濃度較高的溶液中，可能發(fā)生溶液溶質(zhì)與溶質(zhì)間的相互作用，形成一種不致熒光的復(fù)合物，從而造成熒光強(qiáng)度反而降低的現(xiàn)象。