PCR耗材包括PCR管(EP管)、8連排管、96孔PCR板、深孔板等這些材質(zhì)一般為聚丙烯PP材質(zhì),具有高品質(zhì)、高純度、高透明的特點,一般都在潔凈空間生產(chǎn)加工。
PCR耗材為什么一般都是PP材質(zhì)的呢,為什么需要環(huán)境潔凈?
因為PCR/qPCR耗材通常會與試劑或樣品直接接觸,而聚丙烯(PP)材質(zhì)是生物學(xué)惰性材料,表面不易于粘附生物分子,且有著良好的化學(xué)耐性,及溫度耐受性(可以121℃ 高壓滅菌,也可以承受熱循環(huán)過程中的溫度變化)。
這里強調(diào)一下耗材質(zhì)量(是否干凈)的重要性。PCR耗材必須保證沒有污染物和抑制劑。高壓和輻射能夠去除細(xì)菌和DNA酶,但不能去除灰塵和DNA殘留,它們可能會抑制PCR反應(yīng)或產(chǎn)生非特異性擴增。物質(zhì)是具有吸光度的,即便是很小的污染物也會吸收反應(yīng)體系中的熒光,影響熒光信號的采集。因此,在生產(chǎn)這些塑料耗材時,從制模到最終的包裝都必須在具有顆粒數(shù)量限制的設(shè)施環(huán)境中進行。
高熱傳遞性
1)極薄的壁厚優(yōu)化熱傳遞減少循環(huán)時間。
之前買的PCR板/管材質(zhì)厚度不一,是不是厚點的穩(wěn)定性更好呢?
不是的,管壁厚度會直接影響熱傳導(dǎo)率,極薄的壁厚可優(yōu)化熱傳遞減少循環(huán)時間。要想提升PCR反應(yīng)效率,保證反應(yīng)穩(wěn)定高效進行,需要選擇均一、超壁薄的PCR耗材。
高反射熒光信號
1)qPCR更推薦使用優(yōu)質(zhì)的白色PCR耗材。
2)管蓋:高透光性,蓋子的光通過率直接關(guān)系著儀器的信號采集,選擇一款透光性高的蓋子對熒光定量檢測極其重要。
不同顏色的PCR管/板,該怎么選呢?
對于普通的PCR反應(yīng)選用透明或者彩色的PCR管都是可以的,而彩色透明的PCR管更有助于進行樣品分類管理。但qPCR更推薦選用優(yōu)質(zhì)的白色PCR耗材。由于qPCR需要實時定量檢測熒光信號強度,更需要靈敏、精確的熒光信號傳遞。實驗證明,與傳統(tǒng)的透明PCR產(chǎn)品相比,白色PCR產(chǎn)品可大程度地反射熒光信號,減少孔間信號交叉污染,可優(yōu)化實時熒光定量PCR的結(jié)果。
高防污染性
1)蓋子要緊密,蓋子與管子的適配性要好,可以減少交叉污染。
2)PCR板要具有升孔緣,有利于密封。
3)一端有手持條,聯(lián)排蓋一端要有突出的手持端,開蓋減少污染。
為什么有的PCR板孔是凸出的,有的卻是平的呢,哪個更好?
適合的才是好的。常見的PCR板有平孔緣和加高孔緣兩種。
平孔緣的反應(yīng)板,可適用于大多數(shù)的PCR儀。
升孔緣的反應(yīng)板,便于封膜,可降低樣品間的交叉污染風(fēng)險。
高辨識性度
1)具有數(shù)字字母標(biāo)識,有助于識別單個孔及樣品位置。2)具有切角,便于辨認(rèn)方向。
對于96孔或者384孔板,為什么切角和標(biāo)識都不是很相同呢?
這是由切角和標(biāo)識的作用決定的。
切角:PCR板的切角位置選擇取決于適配儀器要求,便于定位。
標(biāo)識:PCR板的數(shù)字字母標(biāo)記有助于識別單個孔及樣品位置。一般為凸出的顏色數(shù)字標(biāo)識或者印刻標(biāo)識。對于一些自動化應(yīng)用實驗,印刻標(biāo)記的反應(yīng)板密封性會更好。
體積精確
1)密封性:緊密的蓋子,或者其他方式比如封膜減少蒸發(fā)。
不同體積的PCR管/板,該怎么選呢?
選擇宗旨:依據(jù)具體的實驗要求選用合適的產(chǎn)品。PCR管的體積大多數(shù)都可以滿足PCR反應(yīng)的要求。在此基礎(chǔ)上,推薦優(yōu)先選用低容管。因為低容反應(yīng)管/板有著較小的上方空間,可提高熱傳導(dǎo)率并降低蒸發(fā)。同時,在加樣時需要避免加樣過量或過少。過量會導(dǎo)致熱傳導(dǎo)率下降,溢出及交叉污染,而過少可能會造成樣品蒸發(fā)損失。
常見反應(yīng)管的規(guī)格及體積:
單管/8聯(lián)管/12聯(lián)管:0.5mL,0.2mL,0.15mL,0.1mL
96孔板:0.2mL,0.15mL,0.1mL
384孔板:0.04mL
易操作性
PCR耗材操作起來簡單易行,如:蓋子好蓋但不影響密封性等。PCR耗材要與PCR儀器適配性好。
對于96孔或者384孔板,為什么有的有裙邊,有的沒有呢?
其實PCR/qPCR板的裙邊是為了更好地適應(yīng)自動化應(yīng)用,可為儀器提供穩(wěn)定的支持和機械耐受強度,且移液過程中的穩(wěn)定性也會更高。PCR板一般分為無裙邊、半裙邊、全裙邊。
無裙邊板:可適用于大多數(shù)的PCR儀或qPCR儀,但不適用于自動化應(yīng)用。移液過程中穩(wěn)定性不高,需要配合板托使用。半裙邊板:可適配標(biāo)簽或應(yīng)用條碼,及自動化應(yīng)用,且有著較好的移液穩(wěn)定性。全裙邊板:非常適用于自動化實驗應(yīng)用,也可適配標(biāo)簽及應(yīng)用條碼。機械強度較好,可適用于凸出模塊的PCR儀,且移液過程中穩(wěn)定性高。
PCR封板膜有好多種類型,哪種實驗效果更好呢?
根據(jù)具體的PCR實驗要求選用適配的高質(zhì)量封板膜,不僅能有效地保護樣品,防止污染,還可以提供可信賴的實驗檢測數(shù)據(jù)。
提供溫度耐受性和密封性強、高透明度、操作簡便的高質(zhì)量PCR/qPCR膜。
蘇州阿爾法生物提供的PCR耗材包括:0.2mlPCR管、PCR8聯(lián)排管、八排管、96孔PCR板、酶標(biāo)板、封板膜等,同時提供熒光定量PCR儀、凝膠成像儀、電泳儀等實驗室儀器設(shè)備等。
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