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氣相色譜法檢測(cè)有機(jī)酸
[關(guān)鍵詞] 繼發(fā)齲;牙本質(zhì);有機(jī)酸;氣相色譜法
[摘要] 目的利用氣相色譜法對(duì)繼發(fā)齲牙本質(zhì)中的有機(jī)酸進(jìn)行定性和定量分析，探討繼發(fā)齲形成原因。方法收集45顆牙齒繼發(fā)齲牙本質(zhì)標(biāo)本，用25g/L偏磷酸溶解并勻化，低溫離心，取上清液加入100g/L高碘酸混勻后進(jìn)樣作樣品乳酸分析，其他有機(jī)酸直接進(jìn)樣上清液分析。結(jié)果大多數(shù)繼發(fā)齲牙本質(zhì)標(biāo)本中檢測(cè)到乳酸、甲酸、乙酸、丙酸和丁酸存在，少數(shù)標(biāo)本中檢測(cè)到戊酸。測(cè)得的有機(jī)酸含量由高到低依次為甲酸 （23.27±4.36）g/L;乙酸（3.65±1.49）g/L;丙酸（2.38±0.48）g/L;乳酸（1.25±1.20）g/L;丁酸 （0.89±0.36）g/L和戊酸（0.05土0.13）g/L。結(jié)論繼發(fā)齲牙本質(zhì)中的有機(jī)酸以甲酸、乙酸和丙酸為主，占所有有機(jī)酸組成的93%，主要是細(xì)菌利用齲損中膠原等內(nèi)源性物質(zhì)產(chǎn)生。
[關(guān)鍵詞] 繼發(fā)齲;牙本質(zhì);有機(jī)酸;氣相色譜法
繼發(fā)齲的發(fā)生與多種因素有關(guān)。微生物產(chǎn)生的有機(jī)酸在繼發(fā)齲發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要作用。我們利用氣相色譜法對(duì)繼發(fā)齲牙本質(zhì)中的有機(jī)酸組成和含量進(jìn)行研究，以期進(jìn)一步了解繼發(fā)齲的發(fā)病機(jī)制。
1 材料和方法
1.1 儀器與試劑
普瑞GC-7800型氣相色譜儀，PR-3000型色譜工作站，不銹鋼螺旋柱2mX 3mm，填充GDX—101（80—100目）。
偏磷酸（AR），高碘酸（AR），乙醛（AR），雙蒸水。標(biāo)準(zhǔn)品乳酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸和戊酸均為分析純，用時(shí)以25g/L偏磷酸稀釋至0.25mol/L。
1.2 色譜條件
氣體流速：載氣（N2）50ml/min，H2 45 ml/min，空氣500ml/min。溫度：測(cè)乳酸時(shí)柱溫140℃，汽化室溫度150℃，氫焰檢測(cè)器溫度160℃;測(cè)其他有機(jī)酸時(shí)柱溫190℃，汽化室溫度220℃，氫焰檢測(cè)器溫度220℃，衰減：0，量程：10，紙速：3mm/min。
1.3定性與定量
利用保留時(shí)間一致和峰加高法定性。在樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)酸，根據(jù)峰高是否增加定性。用外標(biāo)法定量測(cè)定，以單點(diǎn)校正法，用峰面積計(jì)算有機(jī)酸含量。
1.4標(biāo)本的收集
收集30例患者（年齡22～60歲）的45顆牙齒繼發(fā)齲牙本質(zhì)標(biāo)本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)?；佳谰哂秀y汞合金或樹脂充填體，或金屬全冠修復(fù)體。標(biāo)本的收集采用兩種方法進(jìn)行：①在患牙治療前收集：將患牙區(qū)行阻滯或浸潤(rùn)麻醉，用刮匙去除表面菌斑及污物，去除原充填體或修復(fù)體，干棉球隔離患牙，氣吹干牙表面，挖匙挖取軟化牙本質(zhì);②從拔除的牙齒上收集：拔除患繼發(fā)齲的牙齒，刮匙去除表面菌斑及污物，縱向劈開牙齒，去除原充填體或修復(fù)體后，用挖匙收集所有齲洞內(nèi)的軟化牙本質(zhì)。繼發(fā)齲的判斷參照Hojo等「1」描述的方法。
5例正常牙本質(zhì)標(biāo)本取自己萌出的無齲阻生第三磨牙作對(duì)照，將取下的正常牙本質(zhì)塊用金剛砂車針磨成碎片，在研缽中研碎。
標(biāo)本收集后立即稱重，放置于具蓋密封的試管中—20℃貯存?zhèn)錅y(cè)。
1.5樣品處理和分析
將標(biāo)本用25g/L的偏磷酸配成150g/L的混懸液，勻化5 h后，10 000 r/min，4℃離心10min。取5ul上清液加5ul 100g/L的高碘酸混合后進(jìn)樣1ul，在上述色譜條件下作樣品乳酸分析，其他有機(jī)酸直接進(jìn)樣1/ul上清液分析。
2 結(jié)果
2.1 精密度與準(zhǔn)確性測(cè)定結(jié)果
對(duì)一已知含量樣品作標(biāo)準(zhǔn)加入回收實(shí)驗(yàn)，并重復(fù)測(cè)定5次，測(cè)其含量，濃度差即為檢出量。標(biāo)本中甲酸、乙酸、丙酸的回收率均在96%以上，因樣品中乳酸、丁酸和戊酸含量較少，因此誤差較大，但回收率仍大于92%。乳酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸和戊酸的變異系數(shù)（%）分別為2.8、1.3、3.0、2.5、 3.2和3.9，結(jié)果表明本法能獲得滿意的精密度和準(zhǔn)確性。