豬新發(fā)冠狀病毒N蛋白，豬新發(fā)冠狀蛋白，豬新發(fā)冠狀病毒抗原

豬δ冠狀病毒(Porcine Deltacoronavirus,PDCo V)是一種新興冠狀病毒,可引發(fā)仔豬的嘔吐、腹瀉、脫水,甚至死亡,給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大損失。PDCo V主要編碼的4個結(jié)構(gòu)蛋白是:纖突蛋白(spike,S)、核衣殼蛋白(nucleocapsid,N)、膜糖蛋白(membrane,M)、小膜蛋白(envelope,E)。其中,N蛋白在病毒RNA復(fù)制和產(chǎn)生過程中起重要作用,表達量大、保守性強,常作為其他冠狀病毒檢測病毒抗體的診斷抗原。決定抗原特異性的分子基礎(chǔ)是抗原表位,通過對其進行研究,有利于進一步設(shè)計兼具有免疫活性和中和活性的多肽、新型診斷試劑和新型疫苗分子。鑒于此,本研究通過制備PDCo V N蛋白單克隆抗體并對抗原表位進行篩選與鑒定,為PDCo V診斷方法和新型疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。為了獲取PDCo V N基因重組蛋白,本試驗分別構(gòu)建了PDCo V NH毒株的N基因的p ET-32a和p GEX-6p-1原核表達載體,并分別轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細胞中,利用濃度為1 m M的IPTG對重組菌進行誘導(dǎo)表達,進一步對表達的PDCo V重組N蛋白進行純化與鑒定。結(jié)果顯示,以PDCo V NH毒株病毒RNA為模板,通過RT-PCR擴增出約1 029 bp的N基因,與預(yù)期大小相符;SDS-PAGE電泳驗證,結(jié)果顯示,PDCo V N基因在大腸桿菌BL21(DE3)中獲得成功表達,表達的重組N蛋白的分子量分別為56 k Da和64 k Da,與預(yù)期大小相符;Western blot結(jié)果中,純化后的蛋白可以特異性的與PDCo V陽性血清發(fā)生反應(yīng),說明其抗原性良好。以表達并純化得到的His-PDCo V-N為免疫原,免疫6~8周齡雌性BALB/c小鼠,共制備得到17株能特異性穩(wěn)定分泌抗PDCo V N蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株,分別命名為1G6、1F8、1E10、2G5、3A7、3F9、3E12、5D11、7B2、7E6、7G6、7F10、8E2、8D4、8E8、9G1、9G11?？贵w亞類鑒定顯示,3E12和9G11細胞株分泌的抗體亞類為Ig G2b型,其余15株均為Ig G1型,輕鏈均為κ鏈。

品牌：PhyCell/費雪
規(guī)格：0.1mg,0.5mg,1mg
該抗原可應(yīng)用于ELISA、膠體金、免疫親和柱層析等免疫檢測。
蛋白載體:牛血清白蛋白/卵清白蛋白/匙孔血藍蛋白BSA/OVA/KLH
物理性狀：液體，避免反復(fù)凍融
來 源:Balb/c 小鼠
免疫層析效價： 1:40以上，偶聯(lián)比大于1:60
蛋白濃度：＞1mg/ml，具體視批次而定
緩沖液：0.01M PBS PH7.4無防腐劑
儲存條件：-20℃以下
穩(wěn) 定 性： 凍融一次復(fù)檢合格，有效期三年
本產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類、治療或診斷應(yīng)用。