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杭州實了個驗生物科技有限公司
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Thermo賽默飛實時熒光定量PCR儀器4347824
| 參考價: | ￥ 128000 |
| 訂貨量: | 1件 |
具體成交價以合同協(xié)議為準- 產(chǎn)品型號
- Thermofisher Scientific/賽默飛世爾 品牌
- 代理商 廠商性質(zhì)
- 杭州市 所在地
訪問次數(shù)：177更新時間：2024-09-11 15:13:07
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產(chǎn)品簡介
| 產(chǎn)地類別 | 進口 | 價格區(qū)間 | 7萬-10萬 |
|---|---|---|---|
| 儀器種類 | 實時熒光定量PCR儀 | 應用領域 | 環(huán)保,生物產(chǎn)業(yè),石油,制藥,綜合 |
產(chǎn)品介紹
賽默飛
Applied Biosystems™ 7300 和 7500 實時熒光定量PCR儀器入門指南：相對定量測定
貨號：4347824
實時熒光定量PCR（qPCR）作為分子生物學研究中的一種強大工具，已廣泛應用于基因表達分析、病原體檢測、基因分型和藥物篩選等多個領域。賽默飛世爾科技旗下的Applied Biosystems™ 7300 和 7500系列實時熒光定量PCR儀器，憑借其出色的性能、簡便的操作和強大的數(shù)據(jù)分析能力，成為眾多實驗室和研究機構(gòu)的。本文將為您詳細介紹這兩款儀器，并著重講解其在相對定量測定中的應用。
一、Applied Biosystems™ 7300 和 7500 實時PCR儀器概述
Applied Biosystems™ 7300 和 7500 實時PCR儀器是專為滿足不同規(guī)模實驗室需求設計的高性能設備。它們均集成了多通道熒光檢測、精準溫度控制和直觀的數(shù)據(jù)分析軟件，能夠幫助科研人員進行快速、準確的核酸定量分析。
1.1 7300 和 7500 系列的區(qū)別
7300 實時熒光定量PCR儀器：7300型號為中小規(guī)模實驗室設計，適合需要中等通量的研究。其系統(tǒng)采用96孔板，適合常規(guī)實驗的定量分析。
7500 實時熒光定量PCR儀器：7500系列與7300的主要區(qū)別在于其優(yōu)化的速度和靈活性，能夠在更短的時間內(nèi)完成PCR反應。7500可用于高通量實驗，擁有更強的處理能力，特別適用于時間要求較高的實驗室。
二、Thermo賽默飛實時熒光定量PCR儀器4347824：核心技術(shù)與特點
Applied Biosystems™ 7300 和 7500 系列實時熒光定量PCR儀器采用的核心技術(shù)確保了實驗數(shù)據(jù)的高靈敏度、準確性和重現(xiàn)性。以下是其幾大核心技術(shù)優(yōu)勢：
2.1 多通道熒光檢測
這兩款儀器均配備了多通道熒光檢測系統(tǒng)，7300 配有四通道檢測能力，而7500系列擁有五通道熒光檢測功能。多通道熒光檢測允許用戶在同一個反應體系中檢測多種目標基因，實現(xiàn)多重PCR的應用。多重檢測極大地提高了實驗的通量，同時節(jié)省了樣本量和反應時間。
2.2 精確的熱循環(huán)系統(tǒng)
PCR反應的關(guān)鍵在于精確的熱循環(huán)控制。Applied Biosystems™ 7300 和 7500 實時PCR儀器內(nèi)置高精度溫度控制模塊，確保每個PCR反應循環(huán)中的溫度變化均一且穩(wěn)定，減少了因溫度波動造成的實驗偏差，從而提高了PCR反應的重復性和可靠性。
2.3 用戶友好的操作界面
這兩款儀器均配備直觀易用的軟件界面，操作流程簡便。其專屬的qPCR軟件能夠自動化分析實驗數(shù)據(jù)，支持多種分析模式，如絕對定量、相對定量、SNP分析和基因分型。即使是新手實驗人員，也能夠迅速掌握儀器操作流程，完成數(shù)據(jù)采集與分析。
2.4 兼容多種化學試劑
7300 和 7500 系列儀器均支持多種熒光染料和探針化學試劑，如SYBR Green、TaqMan探針和分子信標。這種廣泛的兼容性為用戶提供了高度靈活性，能夠根據(jù)具體實驗需求選擇最佳的試劑和反應方案。
三、相對定量測定中的應用
相對定量PCR是一種廣泛應用于基因表達分析的方法，通過與內(nèi)參基因的比較來確定目標基因的相對表達水平。以下是Applied Biosystems™ 7300 和 7500 實時PCR儀器在相對定量測定中的應用方法和流程。
3.1 相對定量的原理
相對定量測定基于△△Ct方法（雙重循環(huán)閾值比較法），其中Ct值代表PCR擴增達到熒光信號閾值所需的循環(huán)數(shù)。通過比較目標基因與內(nèi)參基因的Ct值差異，可以計算目標基因在不同實驗條件下的相對表達水平。
相對定量的計算公式為：
其中：
該方法能夠精準反映基因表達在不同實驗條件下的變化，適用于比較多個樣本或?qū)嶒灄l件下的基因表達差異。
3.2 實驗步驟
1. 樣本準備
在相對定量PCR實驗中，首先需要從實驗樣本（如組織或細胞）中提取高質(zhì)量的RNA，然后通過逆轉(zhuǎn)錄反應將RNA轉(zhuǎn)化為cDNA。為了確保實驗結(jié)果的準確性，RNA樣本必須保持純凈，避免蛋白質(zhì)、DNA或有機溶劑的污染。
2. qPCR反應體系配置
使用Applied Biosystems™ 7300 或 7500儀器，qPCR反應體系通常包括：
目標基因和內(nèi)參基因的引物
cDNA模板
熒光探針（如TaqMan探針）或SYBR Green染料
PCR酶和緩沖液
確保引物設計合理，能夠特異性擴增目標基因和內(nèi)參基因的片段，同時引物退火溫度優(yōu)化到最佳，以提高反應的擴增效率。
3. 設置實驗條件
在Applied Biosystems™ 7300 或 7500系統(tǒng)中，用戶可以輕松設置PCR循環(huán)參數(shù)，包括預變性、退火和延伸步驟。根據(jù)具體實驗的優(yōu)化情況調(diào)整退火溫度和循環(huán)次數(shù)，確保高效的擴增。
4. 數(shù)據(jù)采集與分析
qPCR反應完成后，系統(tǒng)會自動生成Ct值。通過內(nèi)置的軟件，用戶可以輕松地利用△△Ct方法進行相對定量分析。數(shù)據(jù)分析過程中，需確保內(nèi)參基因的Ct值在不同樣本間保持相對穩(wěn)定，才能確保相對定量結(jié)果的準確性。
3.3 數(shù)據(jù)標準化與內(nèi)參基因選擇
在相對定量PCR實驗中，數(shù)據(jù)標準化是非常關(guān)鍵的一步。通常使用內(nèi)參基因來校正樣本間的差異，常見的內(nèi)參基因包括GAPDH、β-Actin和18S rRNA等，這些基因在不同實驗條件下的表達通常保持穩(wěn)定。在進行實驗設計時，選擇適合的內(nèi)參基因能夠顯著提高相對定量結(jié)果的準確性。
四、Thermo賽默飛實時熒光定量PCR儀器4347824：應用實例
4.1 基因表達研究
在基因表達分析中，Applied Biosystems™ 7300 和 7500 實時PCR系統(tǒng)被廣泛應用于檢測特定基因在不同組織、發(fā)育階段或?qū)嶒灄l件下的表達水平。例如，在癌癥研究中，科研人員可以利用這些儀器分析腫瘤組織中與癌癥相關(guān)基因的表達變化，揭示潛在的分子機制。
4.2 病原體檢測
7300 和 7500 系列儀器在病原體檢測方面表現(xiàn)優(yōu)異，尤其是在病毒或細菌核酸檢測中。相對定量方法能夠幫助臨床研究人員量化病原體的感染水平，為疾病診斷和防控提供有力的支持。
4.3 藥物篩選與毒性評估
在藥物篩選過程中，研究人員經(jīng)常使用7300 和 7500 實時PCR系統(tǒng)分析藥物處理后細胞中基因表達的變化，以評估藥物的效果和毒性。這種應用尤其適用于高通量篩選研究，通過多重qPCR檢測多個基因，快速評估藥物對不同基因的調(diào)控作用。
五、優(yōu)勢與應用前景
5.1 高靈敏度與高特異性
Applied Biosystems™ 7300 和 7500 實時PCR系統(tǒng)的高靈敏度能夠檢測到微量的核酸，并精確量化其表達水平。這在分析低豐度基因表達時尤為重要，能夠提供可靠的實驗結(jié)果。
5.2 多重檢測與高通量應用
多重熒光檢測功能使得7300 和 7500 系列能夠在一次反應中同時檢測多個基因，大大提高了實驗效率，減少了樣本和試劑的用量。
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