人膽管癌類器官培養(yǎng)試劑盒
MCE 國際站：Human Cholangiocarcinoma Organoid Kit
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：Basal Medium A : 4℃, 1 year. Shipping with blue ice.Supplement B (50x) & Supplement C (250x) : -20°C, 1 year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
簡介：MCE 人膽管癌類器官培養(yǎng)試劑盒包含膽管癌類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 以及培養(yǎng)添加物 B (50x) 和培養(yǎng)添加物 C (250x)。該產(chǎn)品可有效構(gòu)建人膽管癌類器官。
概述：MCE 人膽管癌類器官培養(yǎng)試劑盒包含膽管癌類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 以及膽管癌類器官培養(yǎng)添加物 B (50x) 和膽管癌類器官培養(yǎng)添加物 C (250x)，可用于有效構(gòu)建人膽管癌類器官。膽管癌類器官能夠高度模擬膽管癌的腫瘤微環(huán)境，便于觀察膽管癌細(xì)胞的生長和增殖情況，可用于追蹤腫瘤細(xì)胞在藥物作用下的變化，篩選藥物的效力與毒性。
描述：
• MCE人膽管癌類器官試劑盒含有膽管癌類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基A、膽管癌類器官添加物B（50x）、膽管癌類器官添加物C（250x），本產(chǎn)品可用于高效構(gòu)建人膽管癌類器官。
• 膽管癌類器官可高度模擬膽管癌腫瘤微環(huán)境，便于觀察膽管癌細(xì)胞的生長增殖情況，可用于追蹤腫瘤細(xì)胞在藥物作用下的變化，篩選藥物的療效和毒性。
操作說明：1. 配制膽管癌類器官培養(yǎng)基按下列組分配制膽管癌類器官培養(yǎng)基，充分混勻后置于冰上備用。2. 提取腫瘤細(xì)胞a. 使用預(yù)冷的原代組織儲存液浸泡新鮮提取的腫瘤組織，并置于 4°C 冰箱中暫時保存。b. 在保證無菌條件下，推薦使用含有 500 μg/mL BSA 的膽管癌類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 或者 PBS 沖洗以去除脂肪或肌肉等非上皮組織成分。然后在細(xì)胞培養(yǎng)皿中用無菌剪刀將沖洗后的腫瘤組織分成盡可能小的碎片（直徑約為 1-2 mm），隨后使用 1 mL 移液槍槍頭將其轉(zhuǎn)移至 15 mL 錐形管中。c. 向 15 mL 錐形管中加入適量腫瘤組織消化液和組織碎片，消化液體積不超過錐形管體積的三分之二。將錐形管置于水平搖床上以 37°C 孵育大約 0.5 小時，直至大部分碎片可以被 1 mL 移液槍槍頭吸起。d. 往腫瘤組織消化混合液中加入適量 FBS，F(xiàn)BS 終濃度為 2%，然后使用 100 μm 的細(xì)胞過濾器在冰上進(jìn)行過濾。e. 使用低溫離心機(jī)在 4°C 溫度下以 250 g 離心 3 分鐘后收集細(xì)胞沉淀。如細(xì)胞沉淀呈紅色，可吸出上清液后加入 1-2 mL 的紅細(xì)胞裂解液重懸，盡量避免移液槍槍頭接觸到試管底。室溫下裂解 1 分鐘后重新置于 4°C 低溫離心機(jī)內(nèi)以 250 g 離心 3 分鐘收集細(xì)胞沉淀。f. 往收集的細(xì)胞沉淀中加入適量的膽管癌類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 進(jìn)行重懸，然后置于 4°C 低溫離心機(jī)內(nèi)以 250 g 離心 3 分鐘收集細(xì)胞沉淀，重復(fù)該步驟 1-2 次。3. 構(gòu)建類器官a. 在冰上將收集的腫瘤細(xì)胞重懸于 MCE 基質(zhì)膠中，推薦細(xì)胞密度為 4x104/100 μL 基質(zhì)膠，建議使用基質(zhì)膠原液重懸腫瘤細(xì)胞，如需稀釋，請確?；|(zhì)膠體積與稀釋所用的類器官培養(yǎng)基體積的比例高于 2:1。b. 使用預(yù)先濕潤的 200 μL 移液槍槍頭，然后將基質(zhì)膠與細(xì)胞混懸液迅速注入 24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板的底部，盡量避免產(chǎn)生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細(xì)胞培養(yǎng)板放入 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中孵育 15-25 分鐘直至凝固。c. 待基質(zhì)膠凝固后，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 膽管癌類器官培養(yǎng)基，避免破壞已有的凝膠結(jié)構(gòu)。然后將細(xì)胞培養(yǎng)板放回 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。d. 密切關(guān)注類器官生長狀態(tài)，每隔 3-4 天更換 500 μL 在 37°C 預(yù)熱后的膽管癌類器官培養(yǎng)基體積。7-10 天即可觀察到膽管癌類器官的生成。4. 類器官傳代a. 建議在膽管癌類器官直徑大于 200 μm 或顏色發(fā)黑時吸去上層培養(yǎng)基，加入 500 μL 膽管癌類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A。使用細(xì)胞刮刀或 1 mL 移液槍槍頭吹打從而將細(xì)胞培養(yǎng)孔內(nèi)容物剝離出培養(yǎng)板并轉(zhuǎn)移至 1.5 mL EP 管內(nèi)。b. 使用移液槍槍頭輕柔地吹打至膽管癌類器官與基質(zhì)膠分離，然后置于室溫離心機(jī)內(nèi)以 250-300 g 離心 3 分鐘收集沉淀。隨后加入 1 mL 膽管癌類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 重懸并輕柔地進(jìn)行充分吹打，使類器官分散為碎片。如類器官難以吹打成碎片可使用 0.2-0.5 mL 的類器官傳代消化液置于 37°C 培養(yǎng)箱中充分消化至類器官分散為包含 10—50 個細(xì)胞的細(xì)胞團(tuán)，時間控制在 5 分鐘以內(nèi)。隨后加入 5 倍消化液體積的膽管癌類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 終止消化。c. 在室溫下以 250-300 g 離心 3 分鐘。離心完畢，棄上清，用膽管癌類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 或 PBS 清洗 1-2 次后備用。d. 將收集的類器官碎片在冰上重懸于基質(zhì)膠中，推薦細(xì)胞密度為 4x104/100 μL 基質(zhì)膠，建議使用基質(zhì)膠原液重懸腫瘤細(xì)胞，如需稀釋，請確保基質(zhì)膠體積與稀釋所用的類器官培養(yǎng)基體積的比例高于 2:1。e. 然后將混懸液迅速注入 24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板的底部，盡量避免產(chǎn)生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細(xì)胞培養(yǎng)板放入 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中孵育 15-25 分鐘。f. 待基質(zhì)膠凝固后，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 膽管癌類器官培養(yǎng)基，避免破壞已有的凝膠結(jié)構(gòu)，然后將細(xì)胞培養(yǎng)板放回 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中。g. 密切關(guān)注類器官生長狀態(tài)，每隔 3-4 天更換 500 μL 預(yù)熱的膽管癌類器官培養(yǎng)基。
注意事項(xiàng)：1. 提取原代組織細(xì)胞時需保持全程無菌，避免造成后續(xù)實(shí)驗(yàn)污染。2. 類器官傳代消化時需時刻觀察碎片狀態(tài)，出現(xiàn)小細(xì)胞團(tuán)（10-50 個細(xì)胞）時應(yīng)終止消化，避免時間過長影響類器官后續(xù)生長活力。3. 基質(zhì)膠操作需全程保持低溫避免凝膠，與細(xì)胞重懸后應(yīng)將其迅速注入細(xì)胞培養(yǎng)孔內(nèi)，盡量避免產(chǎn)生氣泡。4. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品5. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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