人胃癌類(lèi)器官培養(yǎng)試劑盒
MCE 國(guó)際站：Human Gastric Cancer Organoid Kit
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲(chǔ)條件：Basal Medium A : 4℃, 1 year. Shipping with blue ice.Supplement B (50x) & Supplement C (250x) : -20°C, 1 year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
簡(jiǎn)介：MCE 人胃癌類(lèi)器官培養(yǎng)試劑盒包含子胃癌類(lèi)器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 以及培養(yǎng)添加物 B (50x) 和培養(yǎng)添加物 C (250x)。該產(chǎn)品可有效構(gòu)建人胃癌類(lèi)器官。
概述：MCE 人胃癌類(lèi)器官培養(yǎng)試劑盒包含胃癌類(lèi)器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 以及胃癌類(lèi)器官培養(yǎng)添加物 B (50x) 和胃癌類(lèi)器官培養(yǎng)添加物 C (250x)，可用于有效構(gòu)建人胃癌類(lèi)器官。胃癌類(lèi)器官能夠高度模擬胃癌的腫瘤微環(huán)境，便于觀察胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖情況，可用于追蹤腫瘤細(xì)胞在藥物作用下的變化，篩選藥物的效力與毒性。
描述：
• MCE人胃癌類(lèi)器官試劑盒含有胃癌類(lèi)器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基A、胃癌類(lèi)器官添加物B（50x）、胃癌類(lèi)器官添加物C（250x），本產(chǎn)品可用于高效構(gòu)建人胃癌類(lèi)器官。
• 胃癌類(lèi)器官可高度模擬胃癌腫瘤微環(huán)境，便于觀察胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖情況，可用于追蹤腫瘤細(xì)胞在藥物作用下的變化，篩選藥物的療效和毒性。
操作說(shuō)明：1. 配制胃癌類(lèi)器官培養(yǎng)基按下列組分配制胃癌類(lèi)器官培養(yǎng)基，充分混勻后置于冰上備用2. 提取腫瘤細(xì)胞a. 使用預(yù)冷的原代組織儲(chǔ)存液浸泡新鮮提取的腫瘤組織，并置于 4°C 冰箱中暫時(shí)保存。b. 在保證無(wú)菌條件下，推薦使用含有 500 μg/mL BSA 的胃癌類(lèi)器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 或者 PBS 沖洗以去除脂肪或肌肉等非上皮組織成分。然后在細(xì)胞培養(yǎng)皿中用無(wú)菌剪刀將沖洗后的腫瘤組織分成盡可能小的碎片（直徑約為 1-2 mm），隨后使用 1 mL 移液槍槍頭將其轉(zhuǎn)移至 15 mL 錐形管中。c. 向 15 mL 錐形管中加入適量腫瘤組織消化液和組織碎片，消化液體積不超過(guò)錐形管體積的三分之二。將錐形管置于水平搖床上以 37°C 孵育大約 0.5 小時(shí)，直至大部分碎片可以被 1 mL 移液槍槍頭吸起。d. 往腫瘤組織消化混合液中加入適量 FBS，F(xiàn)BS 終濃度為 2%，然后使用 100 μm 的細(xì)胞過(guò)濾器在冰上進(jìn)行過(guò)濾。e. 使用低溫離心機(jī)在 4°C 溫度下以 250 g 離心 3 分鐘后收集細(xì)胞沉淀。如細(xì)胞沉淀呈紅色，可吸出上清液后加入 1-2 mL 的紅細(xì)胞裂解液重懸，盡量避免移液槍槍頭接觸到試管底。室溫下裂解 1 分鐘后重新置于 4°C 低溫離心機(jī)內(nèi)以 250 g 離心 3 分鐘收集細(xì)胞沉淀。f. 往收集的細(xì)胞沉淀中加入適量的胃癌類(lèi)器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 進(jìn)行重懸，然后置于 4°C 低溫離心機(jī)內(nèi)以 250 g 離心 3 分鐘收集細(xì)胞沉淀，重復(fù)該步驟 1-2 次。3. 構(gòu)建類(lèi)器官a. 在冰上將收集的腫瘤細(xì)胞重懸于 MCE 基質(zhì)膠中，推薦細(xì)胞密度為 4x104/100 μL 基質(zhì)膠，建議使用基質(zhì)膠原液重懸腫瘤細(xì)胞，如需稀釋?zhuān)?qǐng)確?；|(zhì)膠體積與稀釋所用的類(lèi)器官培養(yǎng)基體積的比例高于 2:1。b. 使用預(yù)先濕潤(rùn)的 200 μL 移液槍槍頭，然后將基質(zhì)膠與細(xì)胞混懸液迅速注入 24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板的底部，盡量避免產(chǎn)生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細(xì)胞培養(yǎng)板放入 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中孵育 15-25 分鐘直至凝固。c. 待基質(zhì)膠凝固后，在每個(gè)孔邊緣緩慢注入 500 μL 胃癌類(lèi)器官培養(yǎng)基，避免破壞已有的凝膠結(jié)構(gòu)。然后將細(xì)胞培養(yǎng)板放回 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。d. 密切關(guān)注類(lèi)器官生長(zhǎng)狀態(tài)，每隔 3-4 天更換 500 μL 在 37°C 預(yù)熱后的胃癌類(lèi)器官培養(yǎng)基體積。7-10 天即可觀察到胃癌類(lèi)器官的生成。
注意事項(xiàng)：1. 提取原代組織細(xì)胞時(shí)需保持全程無(wú)菌，避免造成后續(xù)實(shí)驗(yàn)污染。2. 類(lèi)器官傳代消化時(shí)需時(shí)刻觀察碎片狀態(tài)，出現(xiàn)小細(xì)胞團(tuán)（10-50 個(gè)細(xì)胞）時(shí)應(yīng)終止消化，避免時(shí)間過(guò)長(zhǎng)影響類(lèi)器官后續(xù)生長(zhǎng)活力。3. 基質(zhì)膠操作需全程保持低溫避免凝膠，與細(xì)胞重懸后應(yīng)將其迅速注入細(xì)胞培養(yǎng)孔內(nèi)，盡量避免產(chǎn)生氣泡。4. 本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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