人外周血淋巴細胞
產品名稱 ：人外周血淋巴細胞
產品貨號 ：YLK-XB0691h
組織來源 ：血液組織
產品規(guī)格 ：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介：
外周血淋巴細胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中首ci提出外周血這一新概念。淋巴細胞(lym phocyte)是白細胞的一種，是體積最小的白細胞。
其由淋巴器官產生，主要存在于淋巴管中循環(huán)的淋巴液中，是機體免疫應答功能的重要細胞成分，是淋巴系統(tǒng)幾乎全部免疫功能的主要執(zhí)行者，是對抗外界感染和監(jiān)控體內細胞變異的一線“士兵"。淋巴細胞是一類具有免疫識別功能的細胞系，按其發(fā)生遷移、表面分子和功能的不同，可分為T 淋巴細胞(又名T 細胞)、B淋巴細胞(又名B細胞)和自然殺傷(N K )細胞。
T細胞和B細胞都是抗原特異性淋巴細胞，它們的最初來源是相同的，都來自造血組織。T淋巴細胞隨血循環(huán)到胸腺，在胸腺激素等的作用下成熟，而B細胞在骨髓中分化成熟。當受抗原刺激后，T淋巴細胞即轉化為淋巴母細胞，再分化為致敏T淋巴細胞，參與細胞免疫，其免疫功能主要是抗胞內感染、瘤細胞與異體細胞等；而B淋巴細胞是先轉化為漿母細胞，再分化為漿細胞，產生并分泌免疫球蛋白(抗體)，參與體液免疫，其功能是產生抗體，提呈抗原，以及分泌細胞內因子參與免疫調節(jié)；N K 細胞不依賴抗原刺激而自發(fā)地發(fā)揮細胞毒效應，具有殺傷靶細胞的作用。
質量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ： 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 懸浮
細胞形態(tài) ： 圓形
傳代特性 ： 不增殖；不傳代
傳代比例 ： 不傳代
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完培至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內加入5ml完培終止消化。
3) 經1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內。
4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱)。
5) 原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰/酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和公司技術部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決
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