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          深圳市安培生物科技有限公司
                                                                        
          
										  中級(jí)會(huì)員 | 第5年									
          
                                    								
          

							
          
						
          
                        

					
          
										
          
						
          
                            							
          
								
          
								
          
									
          19126518388
          
								
          
							
          
                            						
          
					
          
										
				
          
			
          
			
          
				
          
					
				
          
			
          
		
          

		
		 
				
          
			
          
				
			
          
		
          
		
          
			
          
				
          
					
          
						

						
          
							
          
																														
          
											
          血清系列
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          細(xì)胞轉(zhuǎn)染
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          支原體清除
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          細(xì)胞凍存
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          實(shí)驗(yàn)耗材
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          分子試劑
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          細(xì)胞增殖與凋亡
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          Biozellen系列
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          培養(yǎng)基
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          ELISA試劑盒
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          TOYOBO（東洋紡）
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          ZYMO RESEARCH
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          Greiner（格瑞納）
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          IKA（艾卡）
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          化學(xué)發(fā)光底物（ECL）
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          PROSPEC系列
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          Epigentek系列
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          微生物檢測(cè)
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          細(xì)胞生物學(xué)
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          Corning康寧
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          解離試劑
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          細(xì)胞類-實(shí)驗(yàn)耗材
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          原代細(xì)胞
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          植物檢測(cè)系列試劑盒
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          SERANA
          
											
          
											
          
																						 												BSA
											 																						
          
											
          
																					
          
											
          細(xì)胞系
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          生化試劑盒
          
											
          
											
          
																						
          
											
          
																					
          
											
          環(huán)境檢測(cè)系列試劑盒（AKEN）
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          類器官培養(yǎng)
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          緩沖器和解決方案
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          生物三凝膠基質(zhì)
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          細(xì)胞因子分子
          
											
          
											
											
          
																					
          
											
          生物樣本庫(kù)
          
											
          
											
											
          
																																						

							
          
                            						    
                            						
          



						



          
					
          
						
          混合淋巴細(xì)胞增殖
          
						
          
							時(shí)間：2023/1/11閱讀：1032
							
          
							
				
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          簡(jiǎn)介
          混合淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)也稱混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（MLC）或稱混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MLR），常用于器-官-移-植前的組織配型，以測(cè)定受體和供體主要組織相容性抗原（HLA 抗原）相容的程度。
          材料與儀器
          器材：細(xì)胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、吸管等、CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱、超凈臺(tái)。
          試劑：
          ① 10％FCS-RPMI 1640 培養(yǎng)基 ;
          ② 細(xì)胞 DCs 細(xì)胞、反應(yīng)細(xì)胞、外周血單個(gè)核細(xì)胞。
          ③ 3 H-TdR 工作液

          步驟
          混合淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的基本過程可分為如下幾步：
          （一）刺激細(xì)胞（DCs）的制備
          A. 取健康志愿者肝素抗凝的外周血，淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核細(xì)胞
          B. 以 10％ FCS-RPMI 1640 懸浮細(xì)胞置培養(yǎng)瓶中，37℃、5％ CO2 培養(yǎng) 2 小時(shí)，輕輕翻過培養(yǎng)瓶，棄掉培養(yǎng)上清，將非貼壁細(xì)胞棄掉，即得貼壁的單核細(xì)胞
          C. 補(bǔ)加 10％ FCS-RPMI 1640 同時(shí)加入 20 ng/ml 的 hGM-CSF，500 IU/ml 的 IL-4，培養(yǎng)至第 7 天，收集懸浮細(xì)胞，即為 DCs
          D. 刺激細(xì)胞經(jīng) 25 μg/ml 的絲-裂-霉-素 C 或 2000 rad y-射線照射處理使刺激細(xì)胞失去增殖能力。
          （二）反應(yīng)細(xì)胞的制備
          A 取健康人外周血制備單核細(xì)胞，PBS 洗 3 次后，37℃、5％ CO2 貼壁 2 小時(shí)，收集懸浮細(xì)胞，作為反應(yīng)細(xì)胞
          B 以 RPMI 1640 培養(yǎng)液重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度至 1x106 個(gè)/ml。
          （三）混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)
          A 將刺激細(xì)胞調(diào)整濃度分別為 1x106、5x105、2x10、1x105、5x104 個(gè)/ml， 10％FCS-RPMI 1640 培養(yǎng)于 96 孔培養(yǎng)板中，每濃度設(shè)立 3 孔，100μL/孔
          B 將反應(yīng)細(xì)胞濃度按 1x106 個(gè)/ml 每孔分別加入上述各孔中，100μl/孔
          C 同時(shí)設(shè)立刺激細(xì)胞對(duì)照組（不同濃度刺激細(xì)胞 100μl＋培養(yǎng)液 100μl）和反應(yīng)細(xì)胞對(duì)照組（反應(yīng)細(xì)胞 100μl＋培養(yǎng)液 100μl）
          D 37℃，5％ CO2 培養(yǎng) 5 天后，3 H-TdR 摻入率檢測(cè)反應(yīng)細(xì)胞的增殖水平。

          注意事項(xiàng)
          1. 實(shí)驗(yàn)中注意無菌操作
          2. 如作單向混合淋巴細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，則刺激細(xì)胞接受照射劑量要準(zhǔn)確，使細(xì)胞暫時(shí)存活，但失去增殖的能力。

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