激光熒光共聚焦顯微鏡是近年來(lái)科研界重要的光學(xué)技術(shù)之一,它利用激光激發(fā)熒光物質(zhì)并進(jìn)行成像,實(shí)現(xiàn)了對(duì)樣品內(nèi)部結(jié)構(gòu)的實(shí)時(shí)、高分辨成像。其優(yōu)勢(shì)在于能夠同時(shí)獲得多色熒光成像,對(duì)樣品表面進(jìn)行高分辨三維形貌分析,以及在許多生物樣品中使用熒光標(biāo)記的探針進(jìn)行功能成像等。顯微鏡由多個(gè)成像系統(tǒng)、實(shí)時(shí)控制系統(tǒng)以及信息處理系統(tǒng)組成,其中核心成像系統(tǒng)包括激光系統(tǒng)、光學(xué)成像系統(tǒng)和熒光成像系統(tǒng)。
激光系統(tǒng)為成像系統(tǒng)提供了激光光源,它通過(guò)激光器產(chǎn)生激光,經(jīng)過(guò)光導(dǎo)纖維傳輸?shù)斤@微鏡的聚光鏡,再經(jīng)過(guò)聚焦后照射到樣品上,激發(fā)樣品發(fā)出熒光。光學(xué)成像系統(tǒng)是顯微鏡的主體部分,包括了光路系統(tǒng)、照明系統(tǒng)、光學(xué)元件和光學(xué)參數(shù)控制器等。
熒光成像系統(tǒng)是激光熒光共聚焦顯微鏡的重要組成部分之一,它利用激光的高能量激發(fā)樣品發(fā)出熒光,熒光的強(qiáng)度、光譜范圍和壽命等都會(huì)對(duì)圖像的質(zhì)量產(chǎn)生影響。在顯微鏡中,熒光信號(hào)會(huì)被實(shí)時(shí)收集采用了光柵或其他衍射元件形成多光束干涉條紋,從而形成光學(xué)平面。光學(xué)平面上的每個(gè)點(diǎn)都是由多個(gè)激光光束在光學(xué)平面上產(chǎn)生的干涉條紋組成的,通過(guò)這些干涉條紋可以實(shí)現(xiàn)三維物體的光學(xué)重建。
在激光熒光共聚焦顯微鏡中,通過(guò)對(duì)激光束進(jìn)行掃描,可以實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的三維空間結(jié)構(gòu)的掃描,得到樣品的三維空間信息。顯微鏡可以應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)、材料科學(xué)、醫(yī)學(xué)、組織學(xué)等領(lǐng)域。在細(xì)胞生物學(xué)中可以用于觀察細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能,對(duì)細(xì)胞進(jìn)行定量分析和定性分析。在材料科學(xué)中可以用于觀察材料的微觀結(jié)構(gòu)和表面形貌,對(duì)材料進(jìn)行表征和測(cè)試。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域可以用于觀察病變組織的形態(tài)和結(jié)構(gòu),對(duì)疾病進(jìn)行診斷和治療。