慢性肝臟疾病以及隨之帶來(lái)的肝纖維化是普遍且日益嚴(yán)重的公共健康問(wèn)題。非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD, Non-alcoholic fatty liver disease）是指除外酒精和其他明確的損肝因素所致的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪過(guò)度沉積為主要特征的臨床病理綜合征。隨著肥胖和代謝疾病患者人數(shù)的增加，NAFLD逐漸成為慢性肝病的首要病因。

          NAFLD的發(fā)展與多種病理生理學(xué)的破壞有關(guān)，其中氧化應(yīng)激是該疾病發(fā)展的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)力之一。肝損傷和壞死性炎癥由驅(qū)動(dòng)纖維化的活性氧簇（ROS, Reactive oxidative species）介導(dǎo)。目前，由于缺乏用于監(jiān)測(cè)炎癥和肝纖維化進(jìn)程的無(wú)創(chuàng)方法，肝活檢仍是臨床診斷NAFLD的金標(biāo)準(zhǔn)。

          內(nèi)源性脂褐素（lipofusion）是ROS的副產(chǎn)物，在808nm激光激發(fā)下，能夠在近紅外（NIR, Near-infrared;700nm-1000nm）和短波紅外（SWIR, Shortware-infrared;1000-2000nm）范圍內(nèi)檢測(cè)到。本文作者通過(guò)脂褐素的紅外成像無(wú)創(chuàng)評(píng)估壞死性炎癥活動(dòng)和纖維化階段，實(shí)現(xiàn)慢性肝病的無(wú)創(chuàng)監(jiān)測(cè)。

          首先，在四氯化碳（CCl4, Carbon tetrachloride）誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠模型中，能夠在肝臟處檢測(cè)到自發(fā)熒光信號(hào)，而正常組小鼠肝臟處則無(wú)明顯的信號(hào)。在離體的肝臟中，也呈現(xiàn)相同的情況。

圖1. （a）進(jìn)行性纖維化組和對(duì)照組小鼠自發(fā)熒光 （b、c）6周后小鼠自發(fā)熒光強(qiáng)度 （d、e）6周后離體肝組織的自發(fā)熒光強(qiáng)度

          隨后進(jìn)行的F4/80巨噬細(xì)胞標(biāo)記以及三種脂褐素/類(lèi)固醇脂質(zhì)體染色劑蘇丹黑B染色（SBB, Sudan black B）、尼羅藍(lán)（NBS, Nile blue A sulfate）、高碘酸希夫糖酶（PAS-D, Periodic Acid Schiff Diastase）染色實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確定脂褐素是肝纖維化小鼠模型中，自發(fā)熒光信號(hào)的來(lái)源。

圖2. 肝纖維化小鼠肝臟免疫組織化學(xué)染色切片明場(chǎng)圖片和自發(fā)熒光圖片

          接著，在小鼠肝纖維化消退實(shí)驗(yàn)中，前3周進(jìn)行CCl4肝損傷的誘導(dǎo)，后5周進(jìn)行肝損傷的恢復(fù)，8周后小鼠的體內(nèi)熒光成像以及小鼠離體肝臟熒光成像顯示，肝纖維化消退組的小鼠與對(duì)照組的熒光強(qiáng)度無(wú)明顯的差異，而與8周CCl4誘導(dǎo)的小鼠相比，兩者的熒光強(qiáng)度有明顯的差異性。

圖3. （a）小鼠肝纖維化消退實(shí)驗(yàn)方案示意圖 （b、c）3組小鼠體內(nèi)熒光成像 （d、e）3組小鼠離體肝臟組織熒光成像

          與此同時(shí)，作者還研究了在高脂飲食小鼠模型中利用脂褐素自發(fā)熒光對(duì)NAFLD進(jìn)行追蹤的實(shí)驗(yàn)。通過(guò)小鼠體內(nèi)自發(fā)熒光圖像以及離體肝組織熒光圖像可以明顯的觀察到肝臟處的熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，說(shuō)明隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)，肝臟處的脂褐素的濃度升高，肝纖維化的程度加深。

 圖4. （a）高脂飲食小鼠模型中，體內(nèi)肝臟處的自發(fā)熒光（b）離體肝臟的熒光成像

           后，研究人員進(jìn)一步證明了非酒精性脂肪性肝炎（NASH, Non-alcoholic steatohepatitis）患者的活檢樣本也表現(xiàn)出NASH與NASH肝硬化相關(guān)的NIR-SWIR自發(fā)熒光，NIR-SWIR自體熒光可以區(qū)分非肝硬化性NASH患者和NASH肝硬化患者，從而為進(jìn)一步研究慢性肝病診斷領(lǐng)域打開(kāi)了大門(mén)。

圖5 （a）NASH患者樣本組織染色切片 （b）切片NIR-SWIR熒光成像

文獻(xiàn)來(lái)源： 

Nature Biomedical Engineering volume 4, pages801–813(2020)

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