熒光/光吸收法過氧化氫定量試劑盒

產(chǎn)品貨號：26310

產(chǎn)品規(guī)格：100 次/500 次

產(chǎn)品簡介：

      熒光/光吸收法過氧化氫定量試劑盒用于定量分析細胞及酶水平的過氧化氫含量。

      在過氧化物酶的存在下，Reagent A 能夠與過氧化氫以 1：1 的比例反應(yīng)，生成物有紅色熒光，該熒光可在激 發(fā)光 571nm，發(fā)射光 585nm 處被監(jiān)測（激發(fā)光亦可用 530-571nm 波長激發(fā)，發(fā)射光可用 580-590nm 監(jiān)測）。

      熒光/光吸收法少檢測限為 50nM 過氧化氫。

包裝清單:

操作步驟：

1. 普通樣品過氧化氫含量測定:

2. 用超純水將 10×Reaction Buffer 稀釋為 1×Reaction Buffer。

3. 于 96 孔板中每孔加入 94μl 1×Reaction Buffer。

4. 于 96 孔板中加入 5μl 樣品，不足 5μl 的用 1×Reaction Buffer 補足 5μl。

5. 于 96 孔板中加入 0.5μl Reagent A，0.5μl Reagent B。

6. 37℃避光孵育 5min。

7. 用酶標儀激發(fā)光 571nm，發(fā)射光 585nm 檢測（激發(fā)光亦可用 530-571nm 波長激發(fā)，發(fā)射光可用 580-590nm 監(jiān)測），分析數(shù)據(jù)。

8. 可選：除步驟 6 所示熒光檢測，亦可在 560nm 處檢測吸光度以用于數(shù)據(jù)分析。

9. 背景扣除：除待測樣品孔，需做空白孔（用 5μl 1×Reaction Buffer 代替樣品）檢測背景值。

細胞內(nèi)過氧化氫含量測定：

1. Reaction mixture 制備：每個樣品準備 100μLReaction mixture。包含：0.5μl Reagent A，0.5μl Reagent B， 10μl 10×KRPG Buffer，89μl 超純水。根據(jù)實驗樣品數(shù)，準備適量 Reaction mixture。

2. 將 100μl Reaction mixture 加入 96 孔板中，37℃避光孵育 5min 備用。

3. 細胞樣品制備：準備收集約 1.5×10 4個細胞于 1.5ml 離心管中，PBS 清洗后 3000rpm 離心 5min，

4. 棄上清。

5. 加入 20μL KRPG buffer 懸浮的細胞（約 1.5×10 4個細胞）于步驟 2 的 96 孔板中，37℃避光孵育 10min。 如需空白對照，以 20μL KRPG buffer 代替細胞，作為空白對照孔。

6. 用酶標儀激發(fā)光 571nm，發(fā)射光 585nm 檢測（激發(fā)光亦可用 530-571nm 波長激發(fā)，發(fā)射光可用 580-590nm 監(jiān)測），分析數(shù)據(jù)。

7. 可選：除步驟 5 所示熒光檢測，亦可在 560nm 處檢測吸光度以用于數(shù)據(jù)分析。

注意事項 ：

1. Reagent A 和 Reagent B 為光敏試劑，請避光保存。

2. 待測樣品中，DTT 或β巰基乙醇濃度不得高于 10μM。

3. 待測樣品 pH 值需小于 8.5。

4. 建議每次使用前用過氧化氫做標準曲線。