紅細(xì)胞裂解液（10×）

產(chǎn)品貨號：T16121

產(chǎn)品規(guī)格：100ml/500ml

產(chǎn)品簡介：

  在生物科研領(lǐng)域，經(jīng)常需要去除紅細(xì)胞。去除紅細(xì)胞的方法有多種，如ACK LysisBuffer、Tris-氯化銨紅細(xì)胞 裂解液、Gey's Lysis Buffer。紅細(xì)胞裂解液(Red Blood Cell LysisBuffer)是一種從人、鼠或其他哺乳動物等體內(nèi)的 組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細(xì)胞的溶液，其主要有效成分為 NH4Cl。

  尚寶生物 RBC Lysis Buffer(10×)配方經(jīng)過優(yōu)化不同于ACK Lysis Buffer，在裂解無核紅細(xì)胞的同時(shí)幾乎不損 傷淋巴細(xì)胞(Lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。對于裂解、去除有細(xì)胞核紅細(xì)胞，例如鳥或禽類的紅細(xì)胞，效 果不佳，裂解類似細(xì)胞時(shí)，不建議采用。該裂解液經(jīng)過濾除菌，為10×的濃縮液，使用1×RBC Lysis Buffer 處理 過的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測， 尤其適用于流式細(xì)胞檢測或需要高濃度裂解液的情況。

產(chǎn)品組成：

名稱 規(guī)格 保存條件 RBC Lysis Buffer(10×) 100ml/500ml 4℃

自備材料：

1. 胰蛋白酶

2. 離心機(jī)

3. PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液

操作步驟（僅供參考）：

注意：絕大多數(shù)情況下，應(yīng)使用無菌去離子水稀釋 RBC Lysis Buffer(10×)至 1×使用，流式細(xì)胞術(shù)除外。

(一)組織細(xì)胞樣本的常規(guī)操作

1. 制備細(xì)胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液，離心棄上清。

2. 裂解：加入 3～5 倍細(xì)胞沉淀體積的 1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解 1～2min。本操作步驟在 4℃ 條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

3. 離心: 4℃，400～500g 離心 5min，棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。

4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 各一次。

5. 洗滌：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g 離心 2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液 的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的 5 倍以上。

6. 如有必要，重復(fù)上述步驟 5 一次，共洗滌 1～2 次。

7. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

(二)組織細(xì)胞樣本的快速操作(無需洗滌)

1. 制備細(xì)胞懸液：新鮮組織經(jīng)胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，制備細(xì)胞懸液，離心棄上清。

2. 裂解：加入細(xì)胞 5 倍細(xì)胞沉淀體積的 1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解 1～2min。 本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

3. 加入 15～20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。

4. 離心：4℃，400～500g 離心 5min，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。

5. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟 2～4 各一次。

6. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

(三)血液樣本的常規(guī)操作

1. 取新鮮抗凝血，400～500g 離心 5min，棄上清。

2. 裂解: 加入 6～10 倍細(xì)胞沉淀體積的 1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解 1～5min。本操作步驟在 4℃ 條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。(特別提醒：對于鼠的血液，裂解 1～2min 已經(jīng)足夠，對于人的外周 血，宜延長裂解時(shí)間至 4～5min，并且裂解過程中輕輕搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。)

3. 離心: 4℃，400～500g 離心 5min，棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。

4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 一次。

5. 洗滌: 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g 離心 2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液 的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的 5 倍以上。

6. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意：對于微量或少量的血液樣本，可以不用第 1 步操作，可直接加入 10 倍血液體積的 ACK Lysis Buffer 進(jìn) 行第 2 步操作，并在 4℃或室溫裂解 4～15min。對于鼠的血液，裂解 4～5min 已經(jīng)足夠； 對于人的外周血，宜 延長裂解時(shí)間至 10min，但通常不宜超過 15min，并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。

(四)血液樣本的快速操作(無需洗滌)

1. 新鮮抗凝血中加入 10 倍體積的 1×RBC Lysis Buffer，輕輕吹打混勻，裂解 4～15min。 本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對于鼠的血液，裂解 4～5min 已經(jīng)足 夠，對于人的外周血，宜延長裂解時(shí)間至 10min，但通常不宜超過 15min，并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動以促進(jìn)紅 細(xì)胞裂解。）

2. 加入 20～30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。

3. 400～500g 離心 5min，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 一次。

5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：

1. 制備細(xì)胞懸液時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，不一定要制備成單細(xì)胞懸液。

2. 后續(xù)試驗(yàn)如果是用于細(xì)胞培養(yǎng)，操作過程中應(yīng)注意無菌操作，盡量在超凈工作臺內(nèi)操作。

3. 離心步驟盡量在 4℃離心機(jī)上操作。

4. 常規(guī)步驟不快速步驟的區(qū)別在于：常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心，可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效 果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果略差一些，同時(shí)需要大體積的離 心管。

5. 離心洗滌后，通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的檢測。

6. 如果經(jīng)過 1×RBC Lysis Buffer 處理后的樣品后續(xù)用于總 RNA 的提取，在處理細(xì)胞時(shí)不必使用 DEPC 處理的 溶液，即無需在該操作中特意去除 RNase。

7. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：12 個(gè)月有效。