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產(chǎn)品簡介
禽腺病毒D型探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。
詳細介紹
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Fowl Adenovirus(FAdV-D) |
貨號 | CP934250 |
產(chǎn)品特征:
禽腺病毒D型探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進行定量。
特異性強：采用熱啟動酶的激活機制，抑制非特異性擴增 。
重復(fù)性好：擴增曲線重合度高，受干擾影響少。
擴增效率高：擴增曲線Ct值低，起峰快，效率高。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
以下是禽腺病毒D型探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
1-基環(huán)-1-羧酸石蠟切片免疫熒光顯微鏡基礎(chǔ)檢測試盒（無一抗和二抗）
4-硝基苯二酚硫酸二鉀鹽二水合物石蠟切片免疫熒光顯微鏡間接檢測試盒（含熒光二抗）
辛烯二醇單正十二基酯石蠟切片免疫熒光顯微鏡*間接檢測試盒（含一抗和熒光二抗）
1,3-二異基苯石蠟切片免疫熒光顯微鏡直接檢測試盒（含熒光一抗）
反式-2-癸烯酸酯TEM電鏡石蠟切片免疫組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB基礎(chǔ)檢測試盒（無一抗和二抗）
1-(4-BROMOPHENYLSULFONYL)-2-METHYL-1H-IMIDAZOLETEM電鏡石蠟切片免疫組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB間接檢測試盒（含HRP二抗）
2-苯基TEM電鏡石蠟切片免疫組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB*間接檢測試盒（含一抗和HRP二抗）
二二己基硅TEM電鏡石蠟切片免疫組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB直接檢測試盒（含HRP一抗）
DL-氨酰甘氨酸TEM電鏡石蠟切片免疫組織化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP基礎(chǔ)檢測試盒（無一抗和二抗）
吲哚-3-乳酸TEM電鏡石蠟切片免疫組織化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP間接檢測試盒（含AP二抗）
禽腺病毒D型探針法熒光定量PCR檢測試劑盒4-羥基-2-基喹啉TEM電鏡石蠟切片免疫組織化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP*間接檢測試盒（含一抗和AP二抗）
(R)-4-羥基-2咯酮TEM電鏡石蠟切片免疫組織化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP直接檢測試盒（含AP一抗）
反式-4-基環(huán)己酸全組織免疫組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB基礎(chǔ)檢測試盒（無一抗和二抗）
4,4'-雙[N-(1-萘基)-N-苯氨基]-4''-苯基三苯胺全組織免疫組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB間接檢測試盒（含HRP二抗）
1,3-二基-2-(2-噻吩基)咪唑全組織免疫組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB*間接檢測試盒（含一抗和HRP二抗）干粉型SB培養(yǎng)基SB Medium Powder常溫250g
干粉型LB培養(yǎng)基LB Medium Powder常溫250g
干粉型LB-Lennox培養(yǎng)基LB-Lennox Medium Powder常溫250g
干粉型2×YT培養(yǎng)基2×YT Medium Powder常溫250g
桿菌肽溶液,100mg/mLBacitracin Solution-20℃保存1mL
桿菌肽Bacitracin室溫避光保存1g
肝細胞生長因子Growth Factor For Cell Culture-20℃保存5mL
肝素瓊脂糖Heparin Agarose4℃保存5mL
肝素瓊脂糖Heparin Agarose 4℃保存50mL
肝素鈉Heparin Sodium Salt 4℃避光保存1g
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗結(jié)果。產(chǎn)品僅用于科研