詳細(xì)介紹
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn):
1.產(chǎn)品僅用于科研即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對(duì)照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Feline Herpesvirus(FHV) |
貨號(hào) | CP934237 |
產(chǎn)品特征:
貓皰疹病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒靈敏度高:能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng):采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好:擴(kuò)增曲線重合度高,受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高:擴(kuò)增曲線Ct值低,起峰快,效率高。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測(cè)方法:
1.Ⅰ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,產(chǎn)品僅用于科研使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
以下是貓皰疹病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:
L-樟腦酸動(dòng)物糖蛋白酶解法O-糖基分解試盒
L-3-氰基苯氨酸動(dòng)物糖蛋白酶解法*糖基分解試盒
鋇鐵氧體動(dòng)物糖蛋白化學(xué)法*糖基分解試盒
反式-2,3-二-2-烯-1,4-二醇動(dòng)物糖蛋白酶解法非N非O糖基脂酰肌醇(GPI)分解試盒
三氟醋柳酸動(dòng)物糖蛋白電泳遷移檢測(cè)試盒
1-環(huán)己基哌啶動(dòng)物細(xì)胞糖蛋白高碘酸希爾(PAS)法阿爾新藍(lán)(ALCIAN BLUE)染色試盒
4--2-氟酰苯胺動(dòng)物組織石蠟切片糖蛋白高碘酸希爾(PAS)法阿爾新藍(lán)(ALCIAN BLUE)染色試盒
貓皰疹病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒鄰氟苯酸酯動(dòng)物組織冰凍切片糖蛋白高碘酸希爾(PAS)法阿爾新藍(lán)(ALCIAN BLUE)染色試盒
4--2-氟苯酸動(dòng)物全組織糖蛋白高碘酸希爾(PAS)法阿爾新藍(lán)(ALCIAN BLUE)染色試盒
1-基-6,7,8-三氟-1,4-二-4-氧代喹啉-3-羧酸糖蛋白電泳高碘酸希爾(PAS)法阿爾新藍(lán)(ALCIAN BLUE)染色試盒
3--4-碘吡啶聚糖對(duì)氨基苯酸(2-AA)熒光標(biāo)記試盒
1-芐基-1H-吡唑-4-硼酸頻哪醇酯聚糖對(duì)氨基苯酰胺(2-AB)熒光標(biāo)記試盒
十二(烷)酸芐酯苯基酯聚糖鄰氨基吡啶(2-AP)熒光標(biāo)記試盒
4-基苯硼酸聚糖二氨基亞基二氧基苯(DMB)熒光標(biāo)記試盒
D-(-)-酒石酸二酯氨基卞三磺酸(ANTS)熒光輔助糖蛋白電泳(FACE)檢測(cè)試盒雞痘病PCR檢測(cè)試盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存50T
雞敗血支原體PCR檢測(cè)試盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存50T
肌酸激酶測(cè)試盒Oxidative Stress Detection Kit常溫保存24 T
肌酸激酶測(cè)試盒Oxidative Stress Detection Kit常溫保存24 T
肌球蛋白Myoglobin-20℃保存100mg
肌苷Inosine,F(xiàn)ree Base 室溫干燥保存5g
肌醇Inositol室溫干燥保存100g
霍亂弧菌熒光PCR檢測(cè)試盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存50T
霍亂弧菌PCR檢測(cè)試盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存50T
霍亂弧菌O1PCR檢測(cè)試盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存50T