詳細介紹
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
人細胞角蛋白18英文名稱:Human CK-18 ELISA Kit產(chǎn)品別名:人CK-18 elisa試劑盒用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Human CK-18 ELISA Kit |
貨號 | CS-E3887 |
試劑配制:
1、酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標準品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
樣本處理及要求:
1. 血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過一夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注意事項:
1.使用前請保存在2-8℃。復(fù)溶后的標準品若未用完,請廢棄。
2. 微量試劑運輸中顛簸和可能的倒置,會使液體沾到管壁或瓶蓋。因此使用前請1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘,以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。
3. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正?,F(xiàn)象,微加熱至40℃使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液。
(加熱溫度不要超過50℃)使用時洗滌液應(yīng)為室溫。
4. 不同批號的試劑盒組份避免混用(洗滌液和反應(yīng)終止液除外)。
5. 充分輕微混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要,使用微量振蕩器,如無微量振蕩器,可在反應(yīng)孵育前手工輕輕混勻。
6. 在試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙孔檢測。
7. 試驗中所用的試管和吸頭均為一次性使用,嚴禁在不同的液體之間混用!否則將影響試驗結(jié)果。
8. 試驗中請穿著試驗服并帶乳膠手套做好防護工作。特別是檢測血液或者其他體液標本時,請按國家生物試驗室安全防護條列執(zhí)行。
以下是公司正在*的產(chǎn)品:
細菌鈣轉(zhuǎn)試盒Bcl-2(抗原) Bcl-2(多肽抗原)
通用型CHIP DNA分子克隆試盒BDNF (Brain-derived Neurotrophin factor) 腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子(腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子)(多肽片斷抗原)
通用型CHIP DNA分子庫構(gòu)建試盒ACA11 peptide 擬南芥ACA11蛋白多肽抗原
高效CHIP DNA分子克隆試盒AHA3 peptide 植物蛋白AHA3抗原(擬南芥)
高效CHIP DNA分子庫構(gòu)建試盒bFGF 性成纖維細胞生長因子(多肽抗原)
10倍PCR*緩沖液ACE2(Angiotensin converting enzyme 2) 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2抗原
一步法PCR反應(yīng)液BNP 腦鈉素(多肽抗原)
超白金TAG DNA聚合酶BrdU (Bromodeoxyuridine) 脫氧尿苷
人細胞角蛋白18ELISA試劑盒三酸脫氧核糖核苷酸(dNTPs)混合液C5 過敏素C5(補體C5)抗原
一步法平端PCR反應(yīng)液CA125 (Ovarian cancer Anti-gen) 卵巢癌抗原(抗原)
一步法熒光定量PCR反應(yīng)液CK19 細胞角蛋白19抗原
基因基化特異性PCR擴增(MSP)試盒CAD(Caspase-Activated Deoxyribonuclease) Caspase 激活的脫氧核糖核酸酶(抗原)
大量總RNA化銫純化試盒Calponin 1 鈣調(diào)節(jié)蛋白-1(抗原)
全血總RNA純化試盒Caspase-1 (ICE; CASP-1;P45) 天冬酸-胱酸特異性蛋白酶家族(抗原)
組織總RNA純化試盒Caspase-3 (CPP32) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-3(抗原)HRP conjugated Goat anti Mouse IgG1
HRP conjugated Goat anti Mouse IgG1英文名稱對照品大鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA Kit,48T/96T 200mg
ZNF3英文名稱:TTBK1化細絲蛋白A體 英文名稱:AVSD2黑皮質(zhì)3受體體
CRIPT英文名稱:C1orf84 人肺耐藥蛋白(LRP)免疫試盒
英文名稱標準品兔子免疫球蛋白A(IgA)ELISA Kit,48T/96T 200mg
英文名稱:CKAP2Menin抑癌蛋白體
Cadherin 8英文名稱:CHIP人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)免疫試盒
英文名稱標準品人可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA Kit,48T/96T 200mg
英文名稱:CHMP4B+CHMP4C錯配修復(fù)蛋白3體
C6orf174英文名稱:CRAT人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)免疫試盒