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產(chǎn)品簡介
禽嗜血桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Haemophilus gallinarum |
貨號 | CP934295 |
產(chǎn)品特征:
禽嗜血桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動酶的激活機(jī)制，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高，受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快，效率高。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
以下禽嗜血桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
6,6'-二基-2,2'-聯(lián)吡啶細(xì)胞樣品細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試盒
二醇醚醋酸酯冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試盒
5-基異噁唑-3-酰氨全組織細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試盒
4,5-二氨基-6-巰基嘧啶細(xì)胞過氧化酶活性染色試盒
2-酰胺髓性過氧化酶活性染色試盒
氟磺酰基二氟酸酯冰凍切片過氧化酶活性（pH3.3）染色試盒
三氟碘冰凍切片過氧化酶活性（pH5.5）染色試盒
3,4-二硝基苯冰凍切片過氧化酶活性（pH6.5）染色試盒
對氧基苯酸酯冰凍切片過氧化酶活性（pH7.2）染色試盒
三羥基氨基馬來酸酯冰凍切片過氧化酶活性（pH7.2超敏型）染色試盒
(2S,5S)-2,5-己二醇冰凍切片過氧化酶活性（混合型）染色試盒
苯并[B]噻吩-3-酸全組織過氧化酶活性染色試盒
2-(1H-吡唑-1-基)酸細(xì)胞ATP酶活性染色試盒
N-BOC-L-1,2,3,4-四異喹啉-3-羧酸冰凍切片ATP酶活性染色試盒
2-氨基-5-苯酰胺全組織ATP酶活性染色試盒α-Actin小鼠單抗α-Actin Mouse MAb-20℃保存30µL
α2巨球蛋白α2-Macroglobulin-20℃保存25Inh.U
α- 酮戊二酸鈉α-Ketoglutaric Acid Disodium Salt Anhydrous4℃保存5g
α- 酮戊二酸α-Ketoglutaric Acid4℃保存5g
禽嗜血桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒α- 乳糖α-Lactose室溫干燥保存100g
α- 氰基 -4- 羥基肉桂酸α-Cyano-4-Hydroxycinnamic Acid4℃保存10g
α －萘酸NAA (α-Naphthalene Acetic Acid)室溫保存5g
α- 糜蛋白酶Chymotrypsin4℃保存1g
α- 環(huán)狀糊精α-Cyclodextrin室溫干燥保存250mg
α- 淀粉酶AMY (α-Amylase)4℃保存250g
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗結(jié)果。產(chǎn)品僅用于科研