詳細介紹
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
小鼠骨粘連蛋白英文名稱:ON ELISA Kit產(chǎn)品別名:小鼠ON elisa試劑盒用于測定血清,血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | ON ELISA Kit |
貨號 | CS-E3430 |
試劑配制:
1、酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標準品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
樣本處理及要求:
1. 血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過一夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2. 血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
注意事項:
1.使用前請保存在2-8℃。復溶后的標準品若未用完,請廢棄。
2. 微量試劑運輸中顛簸和可能的倒置,會使液體沾到管壁或瓶蓋。因此使用前請1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘,以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。
3. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶,屬于正?,F(xiàn)象,微加熱至40℃使結晶*溶解后再配制洗滌液。
(加熱溫度不要超過50℃)使用時洗滌液應為室溫。
4. 不同批號的試劑盒組份避免混用(洗滌液和反應終止液除外)。
5. 充分輕微混勻?qū)Ψ磻Y果尤為重要,使用微量振蕩器,如無微量振蕩器,可在反應孵育前手工輕輕混勻。
6. 在試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙孔檢測。
7. 試驗中所用的試管和吸頭均為一次性使用,嚴禁在不同的液體之間混用!否則將影響試驗結果。
8. 試驗中請穿著試驗服并帶乳膠手套做好防護工作。特別是檢測血液或者其他體液標本時,請按國家生物試驗室安全防護條列執(zhí)行。
以下是公司正在*的產(chǎn)品:
Taq Plus DNA聚合酶雞極低密度脂蛋白(VLDL)ELISA試盒
Long Taq DNA 聚合酶雞血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試盒
KOD DNA 聚合酶雞腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體3(TRAIL-R3)ELISA試盒
Fast Taq DNA 聚合酶雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試盒
Gold Taq DNA聚合酶雞三狀腺原酸(T3)ELISA試盒
Hotstart TaqDNA聚合酶雞轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGF-β2)ELISA試盒
Super TaqDNA聚合酶雞轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試盒
2×FastTaq PCR MasterMix雞弓形蟲循環(huán)抗原(TCA)ELISA試盒
2×Pfu PCR MasterMix雞狀腺素(T4)ELISA試盒
2×GoldTaq PCR MasterMix雞可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試盒
2×Hotstart Taq PCR MasterMix雞可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試盒
PCR反應增強因子雞可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試盒
快速PCR產(chǎn)物純化試盒雞分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA試盒
DNA段PAGE膠回收試盒雞催乳素(PRL)ELISA試盒
小鼠骨粘連蛋白ELISA試劑盒小片段DNA瓊脂糖凝膠回收試盒雞血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA試盒 聚-L-精酸ELISA Kit for Human Prosalusin
亞基雙萘磺酸鈉人腫瘤壞死因子相關弱凋亡誘導因子(TWEAK)ELISA試盒
十七烷ELISA Kit for Human Tumor necrosis factor ligand superfamily member 12
DA201大孔樹脂人β-微管蛋白(TUBB)ELISA試盒
N-基吲哚氧基酸酯ELISA Kit for Human Tubulin beta chain
D730大孔徑強性陰離子樹脂人肌鈣蛋白T(Tn-T)ELISA試盒
美洛培南三水合物ELISA Kit for Human Troponin T, slow skeletal muscle
銅鐵試人胸腺素β4(T beta-4)ELISA試盒
鉻片ELISA Kit for Human Thymosin beta-4
硫酸鈦人受翻譯調(diào)節(jié)腫瘤蛋白(TCTP)ELISA試盒
XDA-1B大孔樹脂ELISA Kit for Human Translationally-controlled tumor protein
水溶性霍霍巴油人糖酸異構酶1(TPI1)ELSIA試盒
咯喹啉醌ELISA Kit for Human Triosephosphate isomerase
7,8-二羥基黃人轉(zhuǎn)谷酰胺酶2C多肽(TGM2)ELISA試盒
硬脂酰乳酸鈉ELISA Kit for Human Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 2