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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
豬肺炎支原體探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品特征:
靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高，受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快，效率高。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Mycoplasma hyopneumoniae |
貨號(hào) | CP934499 |
豬肺炎支原體探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過(guò)量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針?lè)ǎ?br />探針完整時(shí)，產(chǎn)品僅用于科研報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
以下是豬肺炎支原體探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
抗角蛋白抗體(AKA)檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 三聚氰胺ELISA試劑盒
抗核周因子抗體(APF)檢測(cè)試劑盒 （酶聯(lián)免疫法） 沙丁胺醇ELISA試劑盒
抗環(huán)瓜氨酸肽（CCP）抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 蘇丹ELISA試劑盒
淋球菌（GN）-Ag抗原快速檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 孔雀石綠ELISA試劑盒
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解脲支原體（UU）抗體檢測(cè)試劑盒 （酶聯(lián)免疫法） 隱性孔雀石綠ELISA試劑盒
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人脂聯(lián)素(Adiponectin)抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 氧氟沙星快速檢測(cè)試劑盒
胰島素原(Proinsulin)抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 羅格列酮快速檢測(cè)試劑盒
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人瘦素(Human Leptin)抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 禽流感檢測(cè)試劑盒
胰島素(Ins Active)抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 糖精鈉檢測(cè)試劑盒
C-肽(C-Peptide)抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 豬口蹄疫病毒O型抗體試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
酪氨酸磷酸酶自身抗體（IA2）檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 豬藍(lán)耳病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
抗谷氨酸脫羧酶（GAD）抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 豬瘟病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
抗胰島細(xì)胞抗體（ICA）檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 豬細(xì)小病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
抗胰島素自身抗體（IAA）檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 豬圓環(huán)病毒Ⅱ型IgG抗體試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
炭疽桿菌抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 呋喃它酮代謝物快速檢測(cè)試劑盒
鼠疫桿菌抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 呋喃妥因代謝物快速檢測(cè)試劑盒
豬肺炎支原體探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒3-氨基喹啉飲料精氨酸（arginine）含量高效液相色譜法定量檢測(cè)試盒
3-皮考啉通用型脯氨酸（proline）含量比色法定量檢測(cè)試盒
4,7-二苯基鄰菲繞啉細(xì)胞脯氨酸（proline）含量比色法定量檢測(cè)試盒
4-基甘噁啉組織脯氨酸（proline）含量比色法定量檢測(cè)試盒
4-哌可啉血液脯氨酸（proline）含量比色法定量檢測(cè)試盒
4-羥基喹啉體液脯氨酸（proline）含量比色法定量檢測(cè)試盒
4-酰基嗎啉植物脯氨酸（proline）含量比色法定量檢測(cè)試盒磺胺二基嘧啶溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),有證書57-68-1磺胺二基嘧啶溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),有證書 ,1.2l
磺胺二基嘧啶-d4Sulfamethazine-d41mg
磺胺二基嘧啶，純品型，標(biāo)準(zhǔn)品,有證書57-68-1磺胺二基嘧啶，純品型，標(biāo)準(zhǔn)品,有證書 ,0.25g
磺胺二基嘧啶，純品型，標(biāo)準(zhǔn)品,有證書57-68-1磺胺二基嘧啶，純品型，標(biāo)準(zhǔn)品,有證書 ,0.25g
磺胺多辛 Sulfadoxine2447-57-650mg，供實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)用
磺胺多辛 Sulfadoxine2447-57-650mg，供實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)用
磺胺對(duì)氧嘧啶溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),有證書651-06-9磺胺對(duì)氧嘧啶溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),有證書 100ug/ml,1.2ml
磺胺對(duì)氧嘧啶溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),有證書651-06-9磺胺對(duì)氧嘧啶溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),有證書 100ug/ml,1.2ml
磺胺對(duì)氧嘧啶，純品型，標(biāo)準(zhǔn)品,有證書651-06-9磺胺對(duì)氧嘧啶，純品型，標(biāo)準(zhǔn)品,有證書 ,0.25g
磺胺對(duì)氧嘧啶 Sulfamethoxydiazine651-06-950mg/支，供實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)用