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          小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA試劑盒標(biāo)本的采集與保存

          閱讀:702          發(fā)布時間:2022-1-11

          小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA試劑盒標(biāo)本的采集與保存:


          1.         血清:


          將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置 2 小時或 4oC 過夜,然后 1000×g 離心 20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。


          2.         血漿:


          用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的 30 分鐘內(nèi)于 2-8oC 1000×g 離心 15 分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20oC或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。


          3. 組織勻漿:


          1) 取適量組織塊,于預(yù)冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);


          2) 可同時選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果:首先將組織塊移入玻璃勻漿器,加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進(jìn)行充分研磨,該過程需在冰上進(jìn)行(有條件實驗室可選用機(jī)器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融 進(jìn)一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫;反復(fù)凍融法可重復(fù)2次)。


          3) 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘,留取上清即可檢測。


          4. 細(xì)胞裂解液:


          1)貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化,離心收集細(xì)胞(懸浮細(xì)胞可直接離心收集);


          2)將收集到的細(xì)胞用冷PBS 洗3 次;


          3)物理方法裂解細(xì)胞(可先超聲破碎細(xì)胞,再反復(fù)凍融):


          i 超聲破碎:取適量PBS 重懸細(xì)胞,用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液,使細(xì)胞急劇震蕩破裂。


          ii 反復(fù)凍融:將待破碎的細(xì)胞在-20 oC 以下冰凍,室溫融解,反復(fù)3 次,使細(xì)胞溶脹破碎。


          4)將標(biāo)本于2-8 oC 1500×g 離心10 分鐘,收集上清備用。


          5. 細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它生物標(biāo)本:


          請 1000×g 離心 20 分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。


          注意:


          1.         以上標(biāo)本均需密封保存,4oC保存應(yīng)小于1周,-20oC不應(yīng)超過1個月,-80oC不應(yīng)超過2個月。


          2.         標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫,不應(yīng)加熱使之融解。


          3.         實驗前紅細(xì)胞裂解液必須用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋。

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