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當(dāng)前位置:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司>>生化試劑>>試劑盒>> Cas9x3.0CRISPR基因敲除試劑盒
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產(chǎn)品型號Cas9x3.0
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)經(jīng)銷商
所 在 地蘇州市
更新時間:2024-11-12 07:30:54瀏覽次數(shù):1456次
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CRISPR基因敲除試劑盒
| 產(chǎn)品名稱:CRISPR基因敲除試劑盒
| 產(chǎn)品貨號:Cas9x3.0
| 產(chǎn)品介紹
該試劑盒(Cas9x3.0)是海星生物在多年基因編輯服務(wù)的基礎(chǔ)上研發(fā)的高效快捷的基因敲除試劑盒。包括了人(Human) 和小鼠(Mouse)的所有基因的敲除。
Cas9x3.0試劑盒包含2個Cas9X™算法優(yōu)化的 gRNA序列載體和特異的同源DNA片段,DNA片段含有抗性和GFP 熒光,并攜帶有一段特殊同源序列,不僅可為后續(xù)基因敲除細(xì)胞的篩選提供藥物抗性,也可以通過流式篩選獲得敲除細(xì)胞。
Cas9x3.0試劑盒對分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞都有非常高的敲除效率。
| 產(chǎn)品特點
敲除高效率——比病毒敲除方式更實惠、更穩(wěn)定、更安全
實驗超簡單——操作流程簡單,能養(yǎng)好細(xì)胞就能做基因敲除
| 產(chǎn)品構(gòu)成
| 產(chǎn)品原理
Cas9x3.0試劑盒依據(jù)HDR和 NHEJ修復(fù)原理進行產(chǎn)品開發(fā)。
優(yōu)化的gRNA引導(dǎo)Cas9蛋白對特定位點進行切割,產(chǎn)生DNA 雙鏈斷裂(Double-Strand Break, DSB),并誘導(dǎo)同源線性化DNA片段(攜帶抗性基因和熒光基因)整合到該位點,再通過抗性藥物(puroR )或熒光(GFP)進行篩選,從而獲得基因敲除的細(xì)胞和單克隆。
該試劑盒 (Cas9x3.0) 的敲除效率是傳統(tǒng)基因敲除策略的2~5倍。因為的除策略是通過在基因位導(dǎo)入 Donor DNA( puroR & GFP )從而達到敲除目的蛋白效果,同時也可以在DSB位點導(dǎo)入序列移碼,導(dǎo)致蛋白翻譯提前終止。這兩個原理的疊加,可以輕松獲得“等位基因"純合敲除細(xì)胞株。
| 應(yīng)用流程
該基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0)操作步驟(脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法):
本試劑盒建議采用轉(zhuǎn)染試劑是Lipofectamine® 2000 Reagent (cat#11668-030),具體參照轉(zhuǎn)染試劑說明材料。不同類型的轉(zhuǎn)染試劑,請按照制造商的操作說明進行轉(zhuǎn)染。
注意:懸浮細(xì)胞不推薦使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法。
基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0)操作步驟(電轉(zhuǎn)化法):
本試劑盒推薦Neon轉(zhuǎn)染系統(tǒng),具體參照設(shè)備對每種細(xì)胞參數(shù)。不同類型的電轉(zhuǎn)設(shè)備,請按照制造商的操作說明進行優(yōu)化。
注意:懸浮細(xì)胞推薦使用電轉(zhuǎn)化法。
該基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0)配有eGFP對照DNA,可以按照實際使用的方法和細(xì)胞情況,進行實驗摸索,建議48小時后的目的細(xì)胞的eGFP的陽性率不低于50%, Cas9x3.0試劑盒才能獲得良好的敲除效果。
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