D10045 Dyngo-4a 1256493-34-1 生物試劑

中文名稱(chēng):Dyngo-4a

英文名稱(chēng):Dyngo-4a

別名:  3-Hydroxynaphthalene-2-carboxylic acid-(2,4,5-trihydroxybenzylidene)-hydrazide;Hydroxy-Dynasore

CAS No:1256493-34-1分子式:C18H14N2O5分子量:338.30

D10045 Dyngo-4a ≥95% (HPLC)

溶解性：溶于DMSO(67mg/mL)

保存條件：-20℃

包裝：5mg 25mg 100mg in glass bottle

產(chǎn)品描述

一種有效的dynamin抑制劑，作用于DynI (brain)、DynI (rec)和DynII (rec)，IC50分別為0.38μM，1.1?μM，和 2.3μM 。

動(dòng)力蛋白 GTPase 試驗(yàn)

動(dòng)力蛋白I的活性在其SAI活性狀態(tài)下測(cè)量，或者由三種不同的方法刺激。每個(gè)刺激使動(dòng)力蛋白激活到不同程度，每個(gè)試驗(yàn)需要不同的動(dòng)力蛋白濃度。首先，最大動(dòng)力蛋白活性通過(guò)超聲處理的PS脂質(zhì)體刺激。純化的動(dòng)力蛋白I (10–20nM，在6mM Tris–HCl，20mM NaCl和0.01% Tween 80，pH 7.4中稀釋)在96孔板GTPase緩沖液(5mM Tris–HCl，10mM NaCl，2mM Mg2+，0.05% Tween 80，pH 7.4，1µg/mL亮抑tai酶和0.1mM PMSF)中與GTP 0.3mM，在測(cè)試化合物存在下，以150μL終測(cè)定體積于37°C下培育30分鐘。將10μL 0.5M 乙二胺四乙酸(EDTA) pH 7.4和孔雀綠溶液(40μL: 2% w/v 鉬酸銨四水合物，0.15% w/v 孔雀綠和4M HCl)加入5分鐘以終止反應(yīng)。第二步，動(dòng)力蛋白(20nM)使用10µg/mL紫shan醇穩(wěn)定的粗品牛腦微管根據(jù)相同的方案進(jìn)行刺激。第三步，動(dòng)力蛋白I (50nM)被1μM重組grb2，一種包含SH3的蛋白質(zhì)刺激，該刺激比脂質(zhì)體或微管的效力小5-10倍。最后，動(dòng)力蛋白(500nM) SAI的活性使用高濃度動(dòng)力蛋白測(cè)量，這會(huì)促進(jìn)其協(xié)同自組裝成環(huán)(但不是螺旋狀)。GTPase或內(nèi)吞試驗(yàn)中終DMSO的濃度最高分別為3.3 或1%，但是通常為1%。動(dòng)力蛋白I的GTPase試驗(yàn)不會(huì)被高達(dá)3.3%的DMSO影響?；衔镆?0mM儲(chǔ)備液在100% DMSO中溶解。這些儲(chǔ)備溶液可以在?20°C下儲(chǔ)存幾個(gè)月。隨后將化合物在20mM Tris–HCl pH?7.4中稀釋到50%DMSO的溶液，然后再次稀釋到終試驗(yàn)濃度。對(duì)于4a抑制的動(dòng)力學(xué)分析，動(dòng)力蛋白I以17nM的終濃度與包含PS (2µg/mL) 和不同數(shù)量GTP (50–250μM)的GTPase緩沖液，在濃度范圍為0.5 - 6μM 的4a存在下進(jìn)行培養(yǎng)。加入EDTA (0.5mM, pH 7.4)30分鐘后停止反應(yīng)。曲線使用Michaelis–Menten 方程 v = Vmax[S]/(Km + [S])生成，其中S是GTP底物。Vmax和Km測(cè)定后，數(shù)據(jù)使用Lineweaver–Burke方程，1/v = 1/Vmax + (Km/Vmax)(1/[S])轉(zhuǎn)化。測(cè)定條件基于動(dòng)力蛋白I試驗(yàn)，但有所修改。重組動(dòng)力蛋白II的使用濃度為50nM，被10µg/mL PS刺激。終止前，GTPase反應(yīng)在37°C下進(jìn)行90分鐘。

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