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一、操作步驟：

 

1、在37℃ 5% CO2條件下將細(xì)胞加在處理的載玻片上，用培育基培育，時(shí)間通過預(yù)試驗(yàn)確定；

 

2、細(xì)胞長好后，用洗刷液洗2分鐘×3次，室溫下將其放入細(xì)胞固定液中固定30-60min，蒸餾水洗刷；

 

3、室溫下用洗刷液充沛洗刷固定細(xì)胞，（干燥后-20℃冰凍保存2周以上）

 

4、雜交前將固定的細(xì)胞進(jìn)行如下處理；順次在70%，90%，100%的乙醇中浸泡，脫水每次
5min，用二甲苯洗刷，除掉殘留脂質(zhì)順次在100%，90%，70%乙醇中浸泡，進(jìn)行再水化，每次5min，后浸泡于洗刷液中；

 

5、在37℃用胃蛋白酶溶液10min處理固定的細(xì)胞，以增加細(xì)胞對大分子試劑的通透性，再用洗刷液洗5min；
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6、用1%甲醛固定10min，用洗刷液洗凈。

 

二、留意：

   
1、所有溶液都必須用RNA酶抑制劑處理。
    

2、操作中重要的是及時(shí)固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC處理，以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外，過度固定對原位雜交有明顯的不利影響。