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1.細(xì)胞吸除培育瓶?jī)?nèi)舊培育液。

 

2.參加無菌pbs洗液（5-8mL）悄悄潤(rùn)濕細(xì)胞，稀釋多余的培育基，之后吸走洗液，動(dòng)作要輕，不可吹打到細(xì)胞。

 

3.向瓶?jī)?nèi)參加含0.25%EDTA的胰蛋白酶混合液少許，以能覆滿瓶底為限。 

 

4.置溫箱中2~5分鐘，一旦鏡檢發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大后，細(xì)胞變圓，比較松動(dòng)后，當(dāng)即終止消化。
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5.參加該細(xì)胞對(duì)應(yīng)的培育基6mL（T25培育瓶）或12mL（T75培育瓶）終止消化。

 

6.用吸管通過吸取的培育基悄悄反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。吹打時(shí)應(yīng)盡量以少的次數(shù)將細(xì)胞從壁上吹下，不只要操控吹打的力度、次數(shù)，還要留意要將細(xì)胞盡可能吹成單個(gè)。這樣既能削減死細(xì)胞，又能便于細(xì)胞再次均勻貼壁成長(zhǎng)。

 

7.依據(jù)傳代份額，將細(xì)胞懸液分瓶，再補(bǔ)充培育基后，靜置于溫箱培育，直止貼壁。

 

貼壁細(xì)胞在培育瓶長(zhǎng)成致密單層后，持續(xù)成長(zhǎng)的空間缺乏，培育基中的養(yǎng)分成份也耗費(fèi)較多，同時(shí)代謝廢物也有較多堆積，需要分瓶培育，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代擴(kuò)增。關(guān)于貼壁不太緊的細(xì)胞如293，能夠直接吹散后分瓶。而關(guān)于貼壁較緊的細(xì)胞如CHO，則需要以胰酶消化后再吹散分瓶。

 

關(guān)于懸浮細(xì)胞換液時(shí)只需要補(bǔ)液就行。

 

懸浮細(xì)胞的傳代則不需要用胰酶消化，直接通過計(jì)數(shù)算好傳代的份額，直接分瓶，補(bǔ)液。有些懸浮細(xì)胞趨于成團(tuán)成長(zhǎng)，此刻細(xì)胞成長(zhǎng)狀態(tài)杰出，當(dāng)補(bǔ)液時(shí)，防止吹打。