熒光濾光片的特征:
1. 和燃料的激發(fā)峰、發(fā)射峰匹配,且交疊小
2. 截止深度深
3. 自發(fā)熒光小
4. 透鏡面形好,利于熒光成像的提取。如果透鏡表面的平整度不好,則會產(chǎn)生波前扭矩或楔角,波前扭矩會改變聚焦或成像位置,一般透射波前扭矩(TWD)比反射波前扭矩(RWD)對成像的影響更加直接,也會有更嚴(yán)格的要求。
原理:
一般采用單片無色透明的玻璃作為基底,在玻璃的兩個(gè)表面鍍膜。增反膜的厚度會選擇為半波長的整數(shù)倍,此時(shí)反射疊加增強(qiáng);增透膜的厚度為1/4波長的倍數(shù),此時(shí)投射疊加增強(qiáng)。
熒光濾光片的激發(fā)和成像方式大體可分為如下三種:
聚焦型:入射激發(fā)光聚焦在待測樣品上;
寬場型:入射激發(fā)光束以較大的面積打到樣品上
全內(nèi)反射型(TIRF):激發(fā)光透過樣品,觀測倏逝波成像
包含激發(fā)濾光片,發(fā)射濾光片和分色鏡,專為熒光成像應(yīng)用而設(shè)計(jì),提供長波通、單帶通、雙帶通和三帶通的熒光濾光片供您選擇。分子在吸收帶吸收激發(fā)光譜,然后在發(fā)射帶發(fā)射長波的輻射光譜,即形成了熒光光譜,這就是工作原理。在分析領(lǐng)域,熒光可用于對生物和化學(xué)活性進(jìn)行定性判別、定量分析和實(shí)時(shí)觀察。由于靈敏度高、特異性好、簡便等特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于生物和分析等領(lǐng)域。
熒光濾波片選取的原則是在成像端盡可能讓熒光/發(fā)射光透過,同時(shí)*阻擋激發(fā)光,獲得高的信噪比。尤其是對于多光子激發(fā)和全內(nèi)反射顯微鏡的應(yīng)用,微弱的噪聲也會對成像效果造成很大的干擾,因此對信噪比的要求更高。
常我們看濾光片的參數(shù)一般會看透射率光譜,但往往熒光相對于激發(fā)光的強(qiáng)度很弱,選擇濾光片更需要參考阻擋深度光譜圖——OD值。OD值更能直觀地反映濾光片對光的阻擋特性。
在選擇激發(fā)濾光片和發(fā)射濾光片時(shí),兩者的阻擋深度光譜交點(diǎn)(OD交點(diǎn))是重要的判斷標(biāo)準(zhǔn),一般要求寬場光源激發(fā)是交點(diǎn)OD值大于5,激光激發(fā)時(shí)大于OD6,以實(shí)現(xiàn)較好的熒光信噪比。