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流動(dòng)相配制過程中應(yīng)該避免的10個(gè)壞習(xí)慣！
流動(dòng)相，作為高效液相色譜法重要的組成部分，它不僅僅是作為被分離物質(zhì)的運(yùn)載體，它更是直接影響到分離的好壞，測定的成功與否。流動(dòng)相的物理、化學(xué)性質(zhì)及其純度，直接影響到色譜系統(tǒng)的穩(wěn)定性、分離效率、分離速度、檢測靈敏度。
01在添加有機(jī)相后測量流動(dòng)相的pH值
在水溶液中，pH值被校準(zhǔn)以提供正確的pH值——你需要確認(rèn)的緩沖液是水溶液。如果你用添加了有機(jī)相的水溶液來測量pH值，pH值就會(huì)與有機(jī)相添加前的pH值不同。
然而，最重要的一點(diǎn)是要保持一致。如果你總是在添加有機(jī)相后測量pH值，確保你在方法中說明了這一點(diǎn)，以便每個(gè)人都用同樣的方法。它不會(huì)一定準(zhǔn)確，但至少會(huì)是一致的。這可能比精確的pH值更重要。
02沒有使用緩沖液
緩沖液是用來控制pH值和抵抗pH值變化的。方法的許多其他部分(例如樣品基質(zhì)、空氣中的二氧化碳、流動(dòng)相中水的來源)可以改變流動(dòng)相的pH值，從而導(dǎo)致保留、峰形和峰值響應(yīng)的變化。甲酸等不屬于緩沖試劑。
03沒有在緩沖液正確的pH范圍內(nèi)使用
每個(gè)緩沖鹽有2個(gè)pH值單位范圍，它提供了最佳的pH穩(wěn)定性。在緩沖范圍外面，鹽對pH值的變化是無效的。要么在正確的范圍內(nèi)使用緩沖區(qū)，要么選擇一個(gè)范圍覆蓋所需pH值的緩沖區(qū)。
04將緩沖液加入有機(jī)相中
將水的緩沖液混合到有機(jī)相中，會(huì)導(dǎo)致緩沖液沉淀的高風(fēng)險(xiǎn)——在許多情況下，變化微小，以至于可能不太明顯。常常是將有機(jī)物質(zhì)添加到水相，這大大降低了緩沖沉淀的風(fēng)險(xiǎn)。
05使用泵的梯度混合從0%開始
現(xiàn)代泵在混合流動(dòng)相和在線脫氣上非常有效，然而，并不是每個(gè)使用你的方法的人都有一個(gè)高質(zhì)量的泵。預(yù)混合你的A和B，混合成一個(gè)單一的溶液，在A管路上*運(yùn)行。
將950mL的水溶液與50mL的有機(jī)溶液混合，然后過濾和脫氣。這降低了HPLC之間的可變性，降低了系統(tǒng)中氣泡和沉降的風(fēng)險(xiǎn)。
注意，在泵上混合的95:5不會(huì)和在瓶中預(yù)拌的95:5相同的保留時(shí)間——你通常需要在預(yù)混合時(shí)添加更多的有機(jī)成分。
06調(diào)節(jié)緩沖液的pH值
只使用你正在使用的緩沖鹽的酸或堿。舉例來說，磷酸鈉緩沖液應(yīng)該僅用磷酸或氫氧化鈉來調(diào)節(jié)。
07緩沖液的全部信息
例如，將5g的磷酸鈉放入1000ml的水中
緩沖劑的類型(單鹽基，二鹽基，三鹽基)決定了它的pH緩沖范圍。
所需的質(zhì)量濃度決定了緩沖強(qiáng)度。5g無水磷酸氫鈉和5g一水合磷酸氫鈉會(huì)有不同的緩沖強(qiáng)度，并會(huì)影響到保留。
08用有機(jī)相的填充管路
如果前一種方法在B管路中使用了緩沖液，而你的方法在B管路中使用了有機(jī)相，那么緩沖液很有可能會(huì)在你的泵管路/泵頭中沉淀。我在早期就這樣做了，并且造成了很大的傷害。如果有懷疑——把它沖出來(用80:20水:有機(jī)相)。
09最后一滴流動(dòng)相被使用掉
如果沒有足夠的流動(dòng)相來完成運(yùn)行——將有50%的可能性，氣體將會(huì)在最后幾個(gè)樣品的中運(yùn)行。除了磨損你的泵和色譜柱走干的風(fēng)險(xiǎn)，流動(dòng)相從表面蒸發(fā)，所以在瓶子頂部的流動(dòng)相與大多數(shù)體積相比成分將會(huì)改變。如果你使用瓶子里的最后少量的流動(dòng)相，頂部的這個(gè)部分恰好是貫穿柱子的東西。
10使用超聲儀對流動(dòng)相進(jìn)行脫氣
這對確保你所有的緩沖鹽溶解都很好，但這是最不有效的脫氣方法，它會(huì)迅速加熱流動(dòng)相，導(dǎo)致有機(jī)部分蒸發(fā)。節(jié)省你日后的問題——用5分鐘的時(shí)間來過濾你的流動(dòng)相——它會(huì)在一個(gè)步驟中脫氣和過濾。
文章(文字)來源：分析圈，封面圖片來源創(chuàng)客貼會(huì)員，儀器分析小編整理。
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