各種ELISA檢測方法講解：

　　間接法ELISA檢測：

　　用特異性抗原包被固相載體，加入待測的抗體樣品反應(yīng)后，再加入酶標(biāo)二抗，經(jīng)底物顯色后測定。間接法ELISA需要客戶提供待檢測樣本和包被用的抗原。

　　實(shí)驗(yàn)流程:

　　1. 將抗原吸附于固相載體表面；

　　2. 加待檢抗體，形成抗原-抗體復(fù)合物；

　　3. 加酶標(biāo)抗體（抗抗體）；

　　4. 加入底物；

　　5. 結(jié)果判定：有色產(chǎn)物的生成量＝抗體量。

　　樣品要求:

　　1. 客戶需提供待檢測抗體（也可由我們代購）和包被用抗原。；

　　2. 檢測的樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清、人和動物的血清、血漿時(shí)，樣本收集后應(yīng)立即-20度保存，若長期保存應(yīng)-80度保存；

　　3.樣本量的要求：若一個(gè)指標(biāo)做復(fù)孔檢測應(yīng)不少于250ul，做單孔檢測應(yīng)不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。

　　夾心法ELISA檢測：

　　用*抗原或抗體包被固相載體，加入待測的抗體或抗原反應(yīng)后，再加入酶標(biāo)的第二抗原或抗體，經(jīng)底物顯色后測定，即可計(jì)算出待測抗原的量。此方法所用抗原一般為大分子抗原，如蛋白等，不適用于多肽等半抗原。夾心法ELISA需要客戶提供待檢測標(biāo)本和成對抗原或抗體（亦可由我們購買或制備抗體）。

　　實(shí)驗(yàn)流程:

　　1. 將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)；

　　2. 加受檢標(biāo)本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)問，讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物；

　　3. 加酶標(biāo)抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合；

　　4. 加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。

　　樣品要求:

　　1. 客戶需提供待檢測抗體（也可由我們代購）和包被用抗原。；

　　2. 檢測的樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清、人和動物的血清、血漿時(shí)，樣本收集后應(yīng)立即-20度保存，若長期保存應(yīng)-80度保存；

　　3.樣本量的要求：若一個(gè)指標(biāo)做復(fù)孔檢測應(yīng)不少于250ul，做單孔檢測應(yīng)不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。

　　競爭法ELISA檢測：

　　用特異性抗體包被固相載體，同時(shí)加入酶標(biāo)抗原和待測抗原的混合物樣本，待測抗原將與酶標(biāo)抗原競爭與固相上抗體結(jié)合。經(jīng)底物顯色后測定，計(jì)算兩組數(shù)值之差即可推出待測抗原的量。此方法常用于測定小分子抗原。競爭法ELISA需要客戶提供待檢測標(biāo)本、包被抗體和酶標(biāo)抗原（亦可由我們購買或制備抗原或抗體）。

　　實(shí)驗(yàn)流程:

　　1. 將抗體吸附在固相載體表面；

　　2. 加入酶標(biāo)抗原和待測抗原；

　　3. 加入底物；

　　4. 結(jié)果判定：對照孔與樣品孔有色產(chǎn)物的生成量的差與未知抗原的量成負(fù)相關(guān)。

　　樣品要求:

　　1. 客戶需提供待檢測抗體（也可由我們代購）和包被用抗原。；

　　2. 檢測的樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清、人和動物的血清、血漿時(shí)，樣本收集后應(yīng)立即-20度保存，若長期保存應(yīng)-80度保存；

　　3.樣本量的要求：若一個(gè)指標(biāo)做復(fù)孔檢測應(yīng)不少于250ul，做單孔檢測應(yīng)不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。

　　ELISA檢測的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時(shí)，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。

ELISA檢測又稱為酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）基本原理

它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測物與酶連接，然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。

在這種測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體（免疫吸附劑） ②酶標(biāo)記的抗原或抗體（標(biāo)記物）③酶作用的底物（顯色劑）

ELISA檢測又稱為酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）測量時(shí)，抗原（抗體）先結(jié)合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然后加一種抗體（抗原）與酶結(jié)合成的偶聯(lián)物（標(biāo)記物），此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性，當(dāng)偶聯(lián)物與固相載體上的抗原（抗體）反應(yīng)結(jié)合后，再加上酶的相應(yīng)底物，即起催化水解或氧化還原反應(yīng)而呈顏色。

其所生成的顏色深淺與欲測的抗原（抗體）含量成正比。 這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡觀察，也可以用分光光度計(jì)（酶標(biāo)儀）加以測定。其方法簡單，方便迅速，特異性強(qiáng)。

ELISA檢測又稱為酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）特點(diǎn)

1）靈敏性高

該測定法的靈敏度來自作為報(bào)告基團(tuán)的酶。*, 酶是一種有機(jī)催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng) ，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。ELISA實(shí)現(xiàn)了在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，或在微克、甚至納克水平上對其進(jìn)行定量。

2）ELISA檢測又稱為酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）特異性強(qiáng)

其特異性來自抗體或抗原的選擇性?？乖贵w的結(jié)合實(shí)質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系，所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。