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當(dāng)前位置：> 供求商機(jī)> 熒光定量Q-PCR,Real Time PCR，實時定量PCR
貨物所在地：上海上海市
更新時間：2024-11-24 21:00:06
有效期：2024年11月24日 -- 2025年5月24日
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熒光定量PCR（ realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR）是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實時在線監(jiān)控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進(jìn)行分析，計算待測樣品模板的初始濃度?？捎糜趍RNA、microRNA、lncRNA等基因表達(dá)量的檢測。
熒光定量Q-PCR原理：
熒光定量PCR常有兩種檢測方法
1）探針法
PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；剛開始時, 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。
2）熒光定量Q-PCR檢測染料嵌入法
使用熒光染料SYBR或EVGreen。熒光染料可以結(jié)合到雙鏈DNA上面，當(dāng)體系中的模板被擴(kuò)增時，熒光染料可以有效結(jié)合到新合成的雙鏈上面，隨著PCR的進(jìn)行，結(jié)合的熒光染料越來越多，被儀器檢測到的熒光信號越來越強(qiáng)，從而達(dá)到定量的目的。
熒光定量Q-PCR檢測實驗方法：
1）引物設(shè)計
2）RNA提取
3）RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA
4）real time PCR 反應(yīng)
5）數(shù)據(jù)分析
熒光定量Q-PCR檢測實驗結(jié)果
基因表達(dá)量變化的直方圖、熱圖等
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