tunel細(xì)胞凋亡檢測服務(wù)會(huì)用到伊文思藍(lán)染色液( Evans blue漢稱偶氮藍(lán),分子式C34H24NNa4O14S4,分子量為96080
CAS號為314-13-6伊文思藍(lán)與臺盼藍(lán)都是細(xì)胞活性染料,常用于檢測細(xì)胞膜的完整性和細(xì)胞是否存活。
操作步驟:
(一)血腦屏障通透性
1、取處理后的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(以小鼠為例,靜脈注射 Evans blue stain(0.5%小鼠眼睛、皮膚出現(xiàn)藍(lán)色。0.5~1h后處死小鼠
2、腦組織腦組織置于15m離心管中,加入1 m pbs,迅速用組織勻漿器將腦組織制成勻漿
3、取上清,加入等量三lu乙酸,4℃孵育。3、取上清,按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮,室溫孵育24h 4、離心15min5、取上述溶液,用分光光度計(jì)測620nm處吸光值OD值)。同時(shí)測定已知不同梯度的標(biāo)準(zhǔn)依文思藍(lán)的○D值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測待測樣品的依文思藍(lán)含
(二)活細(xì)胞染色
1、取100μ重懸細(xì)胞到常規(guī)離心管內(nèi),入10oμ Evans blue stair輕輕混勻染色染色時(shí)間可適當(dāng)延長,但不宜超過10min)
2、吸取少量經(jīng)過染色后的細(xì)胞。通常如果要比較精確地進(jìn)行定量,每個(gè)細(xì)胞樣品至少數(shù)500個(gè)細(xì)胞,數(shù)出藍(lán)色細(xì)胞和細(xì)胞總數(shù)。
細(xì)胞存活率計(jì)算公式如下細(xì)胞存活率=(細(xì)胞總數(shù)-藍(lán)色細(xì)胞數(shù))/細(xì)胞總數(shù)x100%
此產(chǎn)品只用于科研,不作用于人體