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日本生研溶血性鏈球菌A群/B群分型血清套裝
廣州健侖生物科技有限公司
(廣州健侖旗下全資子公司:廣州創(chuàng)侖生物制品有限公司)
日本生研公司自創(chuàng)立以來約50年,一直在研發(fā)人類相關(guān)疾病的診斷、治療、預(yù)防為主的疫苗和檢驗試劑,為人類健康已經(jīng)做出重大貢獻,如今更是以疫苗檢驗試劑領(lǐng)域為中心挑戰(zhàn)的技術(shù)。其中日本生研的細菌診斷試劑世界聞名,他的細菌分型抗血清的產(chǎn)品基本上壟斷臨床微生物市場和日本的公共衛(wèi)生檢測實驗室。廣州健侖生物科技公司還提供相關(guān)各類血清產(chǎn)品,包括志賀氏菌,大腸埃希氏菌,沙門氏菌,腸炎弧菌,軍團菌,李斯特菌等。詳情可直接公司工作人員。
廣州健侖生物有代理日本生研、丹麥SSI、德國Sifin、泰國血清:
我司還提供其它進口或國產(chǎn)試劑盒:登革熱、瘧疾、流感、A鏈球菌、合胞病毒、腮病毒、乙腦、乙肝、寨卡、黃熱病、黑熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團菌等試劑盒以及日本生研細菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產(chǎn)品。
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這種方法制備質(zhì)量可控性好,帶有抗生素標記的載體可以在細胞中持續(xù)抑制靶基因的表達,持續(xù)數(shù)星期甚至更久,可以大量擴增。但不能保證轉(zhuǎn)錄后shRNA的正確折疊率,有可能造成非特異性抑制,質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染效率不穩(wěn)定,與細胞類型有關(guān)。因此該方法適用于已知的特定的的siRNA序列,需要維持較長時間的基因沉默,或者需要用抗生素篩選能表達siRNA的細胞,不適用于大量篩選siRNA序列用。
5、病毒粒子制備shRNA
易于制備、純化、濃縮,宿主范圍廣,感染率高,理化性質(zhì)穩(wěn)定,不整合宿主基因組,遺傳毒性和免疫毒性低,是目前登革熱的RNA干擾技術(shù)之一。但該方法耗費時間較長,即使是用快的也得60天左右,對實驗條件要求較高,容量偏小,有可能伴隨部分炎癥反應(yīng)。因此該方法適用于只需要維持較短時間的基因沉默的siRNA,不適用于大量篩選siRNA或長時間的研究,主要原因是成本因素。
6、PCR制備shRNA表達框生產(chǎn)siRNA
這種方法成本較低、方便快捷、可以用于有效序列的篩選,可以用于質(zhì)粒載體構(gòu)建,但轉(zhuǎn)染效率較低,因此該方法適用于篩選siRNA序列,在克隆到載體前篩選登革熱啟動子,不適合大規(guī)模制備。
RNA干擾是指利用特定序列的正義和反義RNA組成的雙鏈RNA (double-stranded RNA,dsRNA)干擾、破壞目標基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA,從而表現(xiàn)為靶基因的沉默并喪失其功能。雖然RNA干擾是一種非常具有應(yīng)用前景的新技術(shù),但是在哺乳動物中隨機選擇的RNAi,其中有70-80%都不表現(xiàn)出RNA干擾效果,這對在哺乳動物中利用RNAi進行基因功能分析提出了問題。目前在設(shè)計小干擾RNA時,依賴試驗者的經(jīng)驗、感覺的部分很多,很難高準確率地設(shè)計能夠產(chǎn)生實際RNA干擾效果的小干擾RNA。另外,因為RNA合成需要時間、費用,所以,為篩選合成的小干擾RNA而合成大量的無效的小RNA,會浪費很大的時間成本和費用成本。
為了有效選擇進行靶基因RNA干擾的目標序列,下面總結(jié)了一些通用的方法和原則:
1、從轉(zhuǎn)錄本(mRNA)的AUG起始密碼開始,尋找“AA”二連序列,并記下其3'端的19個堿基序列,作為潛在的siRNA靶位點。有研究結(jié)果顯示GC含量在45%―55%左右的siRNA要比那些GC含量偏高的更為有效。
Tuschl等建議在設(shè)計siRNA時不要針對5'和3'端的非編碼區(qū)(untranslated regions,UTRs),原因是這些地方有豐富的調(diào)控蛋白結(jié)合區(qū)域,而這些UTR結(jié)合蛋白或者翻譯起始復(fù)合物可能會影響siRNP核酸內(nèi)切酶復(fù)合物結(jié)合mRNA從而影響siRNA的效果。