Illumina公司推出的MiSeq是一臺(tái)在單個(gè)儀器上整合了擴(kuò)增、測序和數(shù)據(jù)分析的新款測序儀,每次運(yùn)行能產(chǎn)生超過1Gb的數(shù)據(jù),且占地面積僅為2平方英尺。MiSeq的流程和準(zhǔn)確性,讓它成為快速且經(jīng)濟(jì)的遺傳分析的理想平臺(tái),適合廣泛的應(yīng)用。同時(shí)Illumina已被FDA大量采購并即將通過FDA認(rèn)證,12年10月,MiSeq系統(tǒng)的測序通量已升級(jí)至8G左右。升級(jí)通過兩個(gè)方面完成,一個(gè)是cluster密度的增大,升級(jí)后cluster密度增加至15-17million,而pair-end讀取的reads數(shù)目將會(huì)增加至30-34million;另一方面是通過測序讀長而提升通量,測序讀長達(dá)到2*300bp,同時(shí)測序速度也有所提升。目前,Broad研究院已經(jīng)利用現(xiàn)有試劑實(shí)現(xiàn)了單端測序300bp讀長,Illumina目前內(nèi)部測序更是完成了2*400bp的pair-end測序。而這些,都是保證在高質(zhì)量數(shù)據(jù)結(jié)果的前提下完成的。
MiSeq性能參數(shù)
Illumina MiSeq測序時(shí)間和數(shù)據(jù)量
讀長(bp) | 時(shí)間 | 總數(shù)據(jù)量 | Q30 |
1×36 | ~4 hrs | 540-610 Mb | ﹥90% |
2×25 | ~5.5 hrs | 750-850 Mb | ﹥90% |
2×100 | ~16.5 hrs | 3.0-3.4 Gb | ﹥85% |
2×150 | ~24 hrs | 4.5-5.1 Gb | ﹥80% |
2×250 | ~39 hrs | 7.5-8.5 Gb | ﹥70% |
Illumina MiSeq讀取量比對
運(yùn)行類型 | 通過過濾的讀?。ò偃f) | |
升級(jí)前 | 升級(jí)后 | |
單端讀取 | 5-7 M | 15-17 M |
末端配對讀取 | 10-14 M | 30-34 M |
工作流程
illumina二代測序儀 MiSeq四大特性
1、較短的實(shí)驗(yàn)周期:從樣品制備開始需要8小時(shí)即可得到超過100M的高質(zhì)量測序結(jié)果。
2、便捷的樣品制備流程:需50ngDNA模板,2小時(shí)的自動(dòng)化操作就可以完成全部樣品制備工作。
3、測序原理:MiSeq繼續(xù)GA和HiSeq平臺(tái)的邊合成邊測序的化學(xué)原理。
4、完整的整合功能:MiSeq可以獨(dú)立完成簇生成,雙向測序及數(shù)據(jù)分析工作,讓經(jīng)費(fèi)和實(shí)驗(yàn)室空間不再成為NGS研究的障礙。
illumina二代測序儀 MiSeq應(yīng)用范圍
1、轉(zhuǎn)錄組測序
派森諾MiSeq測序平臺(tái)是基因組已測序物種的轉(zhuǎn)錄組分析平臺(tái)。公司技術(shù)團(tuán)隊(duì)目前已完成了包括斑馬魚在內(nèi)的多種植物、動(dòng)物的轉(zhuǎn)錄組測序及分析。
2、宏基因組16S rDNA單V區(qū)測序
對16s rDNA的單V區(qū)(V3\V4)進(jìn)行高通量測序,鑒定細(xì)菌群和古生菌群。派森諾的技術(shù)團(tuán)隊(duì)使用Illumina MiSeq測序16S rDNA V4區(qū)并結(jié)合Roche 454 FLX+測序16S rDNA V1~V3區(qū)成功的對雞的腸道環(huán)境細(xì)菌進(jìn)行了鑒定。
3、Small RNA測序
1*35bp的讀長配合了小RNA的測序長度,速度快,靈敏度高。派森諾的技術(shù)團(tuán)隊(duì)目前已完成了鵝的小RNA測序和多種中草藥的小RNA測序。
4、重測序:包括全基因組重測序、簡化基因組測序、外顯子測序。
Illumina MiSeq非常適用于對微生物基因組的重測序,每次運(yùn)行即可完成一個(gè)微生物基因組測序。2011年12月27日,派森諾的技術(shù)團(tuán)隊(duì)利用MiSeq一次運(yùn)行同時(shí)完成了乳酸菌(Lactobacillus casei Zhang和Lactobacillus casei P8)的重測序,基因組覆蓋深度為分別為404倍和213倍,比對至參考序列,基因組實(shí)現(xiàn)全覆蓋,同時(shí)檢測到了多種結(jié)構(gòu)變異,包括插入、缺失和SNP位點(diǎn),并且檢測到了全部質(zhì)粒。
數(shù)據(jù)展示
* 以上產(chǎn)品介紹及數(shù)據(jù)來源于Illumina,僅供參考,以Illumina為準(zhǔn)。