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2-8℃

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

一年

WB,IP等

動(dòng)物細(xì)胞

1.使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
2.提取過程簡單方便。
3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
5.蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

WB,IP等

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.勻漿機(jī)/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測(cè)，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間。

A． 細(xì)胞質(zhì)膜蛋白提取
1. 試劑準(zhǔn)備：
每500 μl冷的蛋白提取液A中加入5 μl試劑B和2 μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取5-10×106個(gè)以上細(xì)胞，在4℃，500×g條件下離心5分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。
3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 細(xì)胞樣品中加入300-500 μl冷的試劑 A，高速渦旋充分混勻。
5. 置2-8℃振蕩30分鐘。
6. 高速渦旋振蕩5秒，然后在4℃，12000×g條件下離心5分鐘。
7. 將上清吸入另一干凈離心管，37℃水浴5-10分鐘。
8. 在37℃下 500×g -1000×g力離心3分鐘。
9. 此時(shí)溶液分為兩層，下層是膜蛋白約為30-50μl。
10. 小心移除上層，用50-150μl冷的試劑C溶解下層質(zhì)膜蛋白部分，充分混勻，即得細(xì)胞質(zhì)膜蛋白。
11. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

B． 組織樣本質(zhì)膜蛋白提取
1. 取適量組織樣本用刀盡可能剪碎，加入冷的蛋白提取液A，用組織勻漿機(jī)/勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體，將勻漿吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。
2. 按照細(xì)胞蛋白的提取方法的第5步驟往下操作即可。

1.蛋白濃度低？
膜蛋白豐度較低，必須保證足夠的細(xì)胞樣品上樣量才能收獲足夠的蛋白，在條件允許的情況下，請(qǐng)盡可能增加細(xì)胞量。處理部分細(xì)胞或組織樣本時(shí)可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

1.RuhanJiang et al.
A study on the degradation efficiency of fluoranthene and the transmembrane protein mechanism of Rhodococcus sp. BAP-1 based on iTRAQ
Science of The Total Environment 2020 （IF=6.551）

2.Cuilian Yu et al.
Taishan Pinus massoniana pollen polysaccharide inhibits subgroup J avian leucosis virus infection by directly blocking virus infection and improving immunity
Sci Rep. 2017 （IF=5.228）


3.Xiaoyun Lin et al.
Chimerically fused antigen rich of overlapped epitopes from latent membrane protein 2 (LMP2) of Epstein–Barr virus as a potential vaccine and diagnostic agent
Cellular & Molecular Immunology 2016 （IF=8.213）

4.Ge Zhao et al.
Phage Display against Corneal Epithelial Cells Produced Bioactive Peptides That Inhibit Aspergillus Adhesion to the Corneas
PLoS ONE March 2012 | Volume 7 | Issue 3, （IF=4.411）

5.Lihong Liao et al.
The Influence of Down-Regulation of Suppressor of Cellular Signaling Proteins by RNAi on Glucose Transport of Intrauterine Growth Retardation Rats
Pediatric Research 2011 Volume 69, Issue 6, pp 497-503 （IF=2.882）