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產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 酵母組蛋白提取試劑盒適用于從各種昆蟲組織樣本中提取組蛋白。提取過程簡單方便，避免了重復(fù)性差的研磨法，超聲波法或壓榨法對酵母細(xì)胞的破壞，避免激烈的機械處理造成的氧化和熱度升高對目的蛋白的破壞作用。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、組蛋白修飾實驗比如乙酰化、甲基化、sumoylation等下游蛋白研究。

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

酵母

產(chǎn)品特點

1.使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
2.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
4.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應(yīng)用

WB,IP等

儀器準(zhǔn)備

1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實驗如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

使用方法

1. 提取液制備：
每500ul蛋白提取液A中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物混勻后置冰上備用。
2. 收集酵母培養(yǎng)物，在4℃，1000×g條件下離心5-10分鐘，吸干上清，收集酵母細(xì)胞。
3. 用冷PBS洗滌酵母細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每100-200mg濕重酵母細(xì)胞（或者100-200ul酵母沉淀體積）中加入250-500ul冷的酵母蛋白提取液E，充分混勻。
5. 在室溫或37℃條件下于振蕩30分鐘-2小時。
6. 在4℃，2000×g條件下離心5-10分鐘，棄上清，留沉淀。
7. 在沉淀中加入500ul蛋白提取液A，混勻后，在4℃條件下輕輕振蕩20-40分鐘。
8. 在4℃，16000×g條件下離心15分鐘，棄上清，留沉淀。
9. 沉淀中加入100ul組蛋白提取液B。
10. 用200ul槍頭反復(fù)吹打混勻或充分渦旋振蕩混勻。
11. 置4℃冰箱過夜存放。
12. 在12000×g條件下離心10分鐘，收集上清。
13. 在上清中加入10-25ul 試劑C充分混勻。
14. 加入上樣緩沖液混勻后煮沸，分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br>

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
處理部分樣本時可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑E和A的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用Bradford法。不適合用BCA法。

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