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產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 組蛋白提取試劑盒提供了一種簡單而應(yīng)用廣泛的方法以及相應(yīng)的試劑提取組蛋白。適用于從各種原代或傳代細(xì)胞和各種實(shí)體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等哺乳動物組織中提取組蛋白。提取過程簡單方便。組蛋白提取產(chǎn)物的產(chǎn)量大約0.4 mg 每107 個(gè)細(xì)胞或100 mg 組織，不同的細(xì)胞和組織中，產(chǎn)量差異很大。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、組蛋白修飾實(shí)驗(yàn)比如乙酰化、甲基化、sumoylation等下游蛋白研究。

保存溫度

2-8℃

注意事項(xiàng)

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

真菌

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
2.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3.紫外檢測蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
4.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應(yīng)用

WB,IP等

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.勻漿機(jī)/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)

使用注意事項(xiàng)：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間。

使用方法

1. 提取液制備：
每500 μl蛋白提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物混勻后置冰上備用。
2. 取100mg真菌樣本用刀盡可能剪碎，加入蛋白提取液A，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。
3. 將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中，在4℃條件下振蕩20-30分鐘。
4. 在4℃，1000×g條件下離心5分鐘，棄沉淀，收集上清。
5. 在4℃，16000×g條件下離心15分鐘，棄上清，留沉淀。
6. 沉淀中加入100 μl組蛋白提取液B。
7. 用200 μl槍頭反復(fù)吹打混勻或充分渦旋振蕩混勻，置4℃冰箱過夜存放。
8. 在12000×g條件下離心10分鐘，收集上清。
9. 在上清中加入10-25 μl 試劑C充分混勻。
10. 加入上樣緩沖液混勻后煮沸，分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
處理部分樣本時(shí)可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑E和A的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用Bradford法。不適合用BCA法。

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