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產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 細菌總蛋白提取試劑盒可以從各種菌體中提取總蛋白，包括革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌，可用于純化蛋白的粗品制備及總蛋白制備。提取過程簡單方便。該試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高質(zhì)量的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳等下游蛋白研究實驗。本試劑盒提取的蛋白為不具有天然活性的蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。 2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。 3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

細菌

產(chǎn)品特點

1.使用方便：不需昂貴設(shè)備。 2.可以處理各種細菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。 3.將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。 4.采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。 5.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。 6.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。 7.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。 8.本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。

產(chǎn)品應(yīng)用

WB,IP等

儀器準備

1.離心機 2.振蕩器 3..渦旋混勻器 4.移液器 5..冰箱 6.冰盒

試劑準備

1.PBS緩沖液 2.蛋白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管 2.吸頭 3.一次性手套

使用注意事項

1.預(yù)實驗很重要。必須要做預(yù)實驗，在正式實驗之前取少量樣本優(yōu)化實驗條件，并像正式樣本一樣認真進行，看實驗結(jié)果是否可行，實驗條件是否適合自己的樣本。由于生物樣本的多樣性，不同樣本的實驗條件通常差異較大，同種細胞的不同模型下需要的實驗條件也可能不同，為了避免浪費正式樣本和試劑，一定要提前預(yù)實驗優(yōu)化實驗條件。 2.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。 3.實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。 4.蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。 5.可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。 6.本試劑盒中提取液和蛋白酶抑制劑中均不含EDTA，根據(jù)需要可自行加入。

使用方法

1.提取液的準備：根據(jù)所需要提取的樣本量，每500 μl裂解液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物和5 μl蛋白穩(wěn)定液，充分混勻后置冰上備用。 2.在4℃， 10000×g條件下將菌液離心5 min，棄上清，盡量吸干剩余液體，收集菌體。 3.用PBS洗菌體一次。若為冷凍菌體直接進行下面操作步驟即可。 4.按每50-100 mg濕重菌體樣本加入250-500 μl提取液，吹打混勻，2-8℃振蕩45-60分鐘。 5.在4℃， 12000×g條件下將菌液離心5分鐘，將上清移入冷的干凈離心管。 6.即得到細菌總蛋白樣品。 7.將總蛋白樣品定量后分裝置于-80℃冰箱或直接用于下游實驗。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？處理部分樣本時可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。有些革蘭氏陽性菌可能較難裂解，有條件的話進行超聲處理。 2.用什么方法定量蛋白？建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。 3.提取時出現(xiàn)膠狀沉淀？蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時會出現(xiàn)少量透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進行后續(xù)實驗即可；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。 4.提取的蛋白具有活性嗎？本試劑盒含有破壞蛋白天然結(jié)構(gòu)的組份，有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白無法保持其天然構(gòu)象和活性。需要活性蛋白的可以選擇貝博其它貨號的試劑盒產(chǎn)品。

參考文獻

1.HaiFeng Su et al. An integrated approach combines hydrothermal chemical and biological treatment to enhance recycle of rare metals from coal fly ash Chemical Engineering Journal 2020 （IF=8.355） 2.HF Su et al. A sequential integration approach using Aspergillus Niger to intensify coal fly ash as a rare metal pool Fuel 2020 （IF=5.128） 3.H Shi et al. Highly efficient visible light driven photocatalytic inactivation of E. coli with Ag QDs decorated Z-scheme Bi2S3/SnIn4S8 composite Applied Catalysis B: Environmental 2019 （IF=11.698）

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