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          植物種子蛋白提取試劑盒
          • 植物種子蛋白提取試劑盒
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          更新時間:2024-08-20 21:00:06

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          產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 植物種子蛋白提取試劑盒提供全套試劑,適用于從各種高淀粉含量的植物種子樣品中提取可溶性蛋白。如水稻、蕎麥、玉米、小麥等。提取過程簡單方便。 本試劑盒中不含有EDTA,與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。
          保存溫度
          2-8℃
          注意事項
          1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
          2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
          3.試劑拆封后請盡快使用完!
          有效期
          一年
          檢測方法
          WB,IP等
          適用樣本
          植物種子
          產(chǎn)品應(yīng)用
          WB,IP等
          儀器準(zhǔn)備
          1.離心機(jī)
          2.振蕩器
          3.勻漿機(jī)/勻漿器
          4.渦旋混勻器
          5.移液器
          6.冰箱
          7.冰盒
          試劑準(zhǔn)備
          1.PBS緩沖液
          2.蛋白定量試劑盒
          耗材準(zhǔn)備
          1.離心管
          2.吸頭
          3.一次性手套
          使用注意事項
          使用注意事項:
          ? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
          ? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
          ? 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
          ? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
          ? 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
          ? 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
          ? 下游實驗如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測,提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,注意提取過程保持低溫操作,縮短離心時間。
          使用方法
          1. 將適量待提取種子樣本剝皮,用PBS或純水洗滌3次。
          2. 將樣本置研缽液氮充分研磨。
          3. 加入1 ml蛋白提取液A充分混勻,移入離心管。
          4. 將離心管置振蕩器輕輕振蕩30分鐘-60分鐘。
          5. 在4℃,15000×g離心20分鐘。
          6. 收集上清,棄沉淀。
          7. 在900 μl上清液體樣本中加入100 μl試劑B,充分混勻。
          8. 冰浴或4℃冰箱靜置30分鐘以上。
          9. 在4℃,15000×g以上條件下離心15分鐘。
          10. 小心移除上層清液丟棄,留沉淀。
          11. 將離心管倒置在吸水紙上干燥離心管。
          12. 加入200 μl試劑C到離心管中。
          13. 在4℃,15000×g以上條件下離心15分鐘。棄上清,留沉淀。
          14. 將離心管倒置在吸水紙上干燥離心管。
          15. 用40 μl - 100 μl試劑D溶解蛋白沉淀,充分混勻。
          16. 在4℃,10000×g條件下離心10分鐘。
          17. 收集上清用于下游實驗。

          常見問題分析
          1.蛋白濃度低?
          部分植物種子蛋白豐度極低,在條件允許的情況下,需要盡可能加大種子樣本的上樣量。
          處理部分樣本時可能沒有裂解,導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理,沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

          2.用什么方法定量蛋白?
          建議用BCA法。不適合用Bradford法,因為試劑E中含有干擾Bradford法的組份,導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系,則可以用Bradford法定量。
          參考文獻(xiàn)
          1.Xiaokang Li, et al.
          Effects of the size and oxidation of graphene oxide on crop quality and specific molecular pathways
          Carbon 2018 (IF=7.082)

          2.Na Zhao, et al.
          MutS HOMOLOG1 silencing mediates ORF220 substoichiometric shifting and causes male sterility in Brassica juncea
          Journal of Experimental Botany 2016 (IF=5.677)

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